【摘 要】
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随着基因工程的发展,可以将植物中不存在的、具有重要生理功能的某些蛋白的编码基因转入植物,达到调节植物生长发育、改良植物产品品质等目的。甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶（BHMT）是一种甲基代谢酶,在动物和微生物体内存在,能够催化甜菜碱的甲基转移到高半胱氨酸上,形成二甲基甘氨酸和甲硫氨酸。目前尚未见植物中存在该基因的相关报道。针对BHMT能够促进甲硫氨酸形成从而促进蛋白质合成的特性,以及甲硫氨酸又是植物中
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随着基因工程的发展,可以将植物中不存在的、具有重要生理功能的某些蛋白的编码基因转入植物,达到调节植物生长发育、改良植物产品品质等目的。甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶（BHMT）是一种甲基代谢酶,在动物和微生物体内存在,能够催化甜菜碱的甲基转移到高半胱氨酸上,形成二甲基甘氨酸和甲硫氨酸。目前尚未见植物中存在该基因的相关报道。针对BHMT能够促进甲硫氨酸形成从而促进蛋白质合成的特性,以及甲硫氨酸又是植物中主要甲基供体腺苷甲硫氨酸（SAM）的底物,甲基参与植物中多种代谢与调节等特点,将BHMT转入植物,探讨其在植物中的作用。本实验从新鲜猪肝脏中提取RNA,RT-PCR得到SsBHMT基因的cDNA片段,测序正确后,构建了pET30a-SsBHMT原核表达载体,并转化到大肠杆菌ER2566和BL21（DE3）中,诱导表达并纯化了目的蛋白。SDS-PAGE电泳检测发现在大肠杆菌BL21（DE3）中目的基因没有表达;在ER2566中,上清中有少量表达,主要以不溶性包涵体形式存在。为了提高目的基因在上清中的表达量,对起始诱导菌液OD值、诱导温度、IPTG浓度等条件进行优化,目的蛋白的表达量增大,但主要还是以包涵体的形式存在。因此用变性剂助溶包涵体,纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测在45KDa与66KDa之间有一条带,与预期蛋白大小一致。同时构建了以CaMV 35S启动子驱动的含有SsBHMT基因的真核表达载体p3301-SsBHMT,将该载体通过农杆菌介导的沾花浸染法导入拟南芥中,多次喷洒0.5%的除草剂筛选得到25个株系。从25个转基因株系T0代中挑选14株提取叶DNA,进行SsBHMT基因和BAR基因PCR检测,均为阳性结果,初步确定SsBHMT已导入拟南芥中。本实验通过目的基因SsBHMT的原核表达和纯化,以及构建植物表达载体并将其转化拟南芥,为探讨动物基因SsBHMT对植物生长发育、抗逆等方面的作用研究奠定基础。
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