丹参抑制铜绿微囊藻活性成分及机理研究

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近年来,水环境污染及富营养化导致河流、湖泊和养殖池塘蓝藻频发,直接威胁到人们的日常生活和渔业生产,造成了很大的社会和经济问题。探索有效、经济、无二次污染的控制蓝藻爆发方法成为当前的研究热点。植物抑藻具有对环境友好的特点,从植物中分离抑藻活性较强的化合物,并以其为先导进行构效关系研究,合成高活性抑藻化合物是研究控制蓝藻药物的一种新途径。通过前期研究发现,丹参(Salvia miltiorrhiza)提取物可以显著抑制蓝藻之一铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)的生长。本研究以铜绿微囊藻为测试藻种,以活性跟踪为指导,通过多级柱层析技术从丹参中分离得到抑藻化合物,并进一步研究了活性化合物的抑藻特性和抑藻机理,获得如下结果:1.丹参抑制铜绿微囊藻活性成分的跟踪分离与结构鉴定:选用5种不同溶剂(石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇、水)超声提取丹参并测定不同提取物的抑藻效果,发现丹参乙酸乙酯提取物的抑藻活性最好。其在第3天和第7天对铜绿微囊藻的EC50分别为85.18mg/L和76.07mg/L,均低于其他提取物相应的EC50值。然后以乙酸乙酯为提取溶剂对丹参进行超声提取,采用活性追踪的方法,通过多级柱层析技术从丹参乙酸乙酯提取物中分离得到了两种单体化合物Ⅰ和化合物Ⅱ。通过波谱学手段鉴定化合物Ⅰ为隐丹参酮(cryptotanshinone),化合物Ⅱ为甘西鼠尾新酮-A(neo-przewaquinone A)。抑藻试验显示甘西鼠尾新酮-A的抑藻活性较强,其第3天和第7天对铜绿微囊藻的EC50分别为7.30mg/L和4.68mg/L。2.丹参活性化合物的抑藻特性研究:测定甘西鼠尾新酮-A对小球藻(Chlorellapyrenoidosa)和斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)的抑制效果,结果表明其对小球藻和斜生栅藻的抑制效应相对铜绿微囊藻较弱。在培养第3天时,甘西鼠尾新酮-A对小球藻和斜生栅藻的EC50分别为27.29mg/L和10.96mg/L,在培养第7天时,其对小球藻和斜生栅藻的EC50分别为14.78mg/L和10.37mg/L。3.丹参活性化合物的抑藻机理研究:从细胞形态学、生理生化指标和基因水平研究了甘西鼠尾新酮-A对铜绿微囊藻发挥抑制效果的机理。甘西鼠尾新酮-A可以对藻细胞的超微结构造成损伤,使细胞变形、凹陷甚至裂解;甘西鼠尾新酮-A会使铜绿微囊藻细胞的可溶性蛋白含量下降,丙二醛含量上升,总抗氧化能力和超氧化物歧化酶活力降低;甘西鼠尾新酮-A还会引起铜绿微囊藻光合作用相关基因rbcL,psaB和psbD的表达下调,在一定程度上影响细胞的光合作用效率。以上结果表明,从丹参中分离得到的甘西鼠尾新酮-A能有效抑制铜绿微囊藻的生长。甘西鼠尾新酮-A发挥抑藻作用的机理包括影响藻细胞的超微结构,降低细胞可溶性蛋白含量,破坏细胞的抗氧化系统,抑制藻细胞光合作用相关基因等。
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