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目前,常用的染色体脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,简称DNA)分子片段化方法主要有四种,分别为:DNA限制性酶切法,水动力剪切法,超声波断裂法,喷射雾化法,每种方法各有利弊。对长链DNA(通常指生物染色体DNA)片段化的主要原因是短的DNA片段有利于进行DNA分子快速杂交和高灵敏目标探测。随着研究的不断深入,专注于DNA片段化技术的科研人员对更小、更快、更高效及低污染的实时检测体系的需求变得越来越大,因此针对DNA片段化技术的要求也越来越高。DNA分子双螺旋结构,是通过内侧氢键形成的碱基对使两条脱氧核苷酸长链稳固地并联起来,同时碱基对之间纵向的相互作用力也进一步提高了DNA分子的稳定性,所以DNA分子的双螺旋结构是一种相对稳定的结构。当前,寻找新型有效的DNA片段化技术是很有研究意义但是极具挑战性的课题。本论文对基于流体力学方法的DNA片段化技术进行了探索性地研究,目的是得到一种新型、高效、快速可控的方法从而实现对生物染色体DNA无规则剪切片段化,进一步得到片段长度低于5kbp的DNA小片段。剪切后利用琼脂糖凝胶电泳实验对得到的DNA片段进行相应的长度检测及分析。实验结果表明鲑鱼精液染色体DNA在不同流体力学模型的剪切作用下发生了断裂。主要的研究内容如下: (1)最优DNA剪切浓度的确定:由于本实验是对~17kbp左右大小的SalmonSperm DNA进行无规则剪切,所以根据剪切的实验结果结合DNA分子电泳迁移率与凝胶浓度的关系,我们采用1.0%或者1.2%的凝胶来进行片段化后的结果分析。根据选用的转动模式所需的溶液体积量来判断,为了减少实验误差及增加实验的有效性,我们采用100μg/mL的DNA溶液。 (2)实验温度及剪切次数对DNA片段化影响的研究:采用流变仪对DNA样品在不同温度下分别进行不同次数的剪切,对剪切后的DNA片段长度进行分析,发现10℃下剪切40次时DNA溶液中部分DNA由原来的~17kbp降到了~10kbp,而0℃及20℃下随着剪切次数的改变,溶液中DNA分子并未发生明显变化。 (3)最佳剪切速率的确定:通过设置不同的剪切速率,采用流变仪对DNA样品在10℃下分别进行40次的剪切,并将其剪切结果与剪切速率为1~2749/s的剪切结果进行比较。分析表明,最佳的剪切速率为1~2749/s。