【摘 要】
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本论文主要就枯草芽孢杆菌产γ-聚谷氨酸的发酵条件进行了研究。 为了使γ-聚谷氨酸的分析方便快捷,研究了γ-聚谷氨酸的分析条件,以甲醇作为γ-PGA的凝聚剂,确定了发酵液
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本论文主要就枯草芽孢杆菌产γ-聚谷氨酸的发酵条件进行了研究。 为了使γ-聚谷氨酸的分析方便快捷,研究了γ-聚谷氨酸的分析条件,以甲醇作为γ-PGA的凝聚剂,确定了发酵液与凝聚剂体积比,离心机转速及HPLC法测定方法。 为降低γ-PGA的生产生产成本,提高γ-PGA的产量,以味精粗料作为γ-PGA的合成前体,并优化了发酵培养基配方,确定1Lγ-PGA发酵培养基成分为:蔗糖70g,蛋白胨5g,味精粗料266ml,NaCl 30g,pH7.0。发酵条件:摇床转速220rpm,37℃。γ-PGA积累到24h达到最大产量41.7g/L,为文献报道值的2倍。 通过响应面法对γ-聚谷氨酸金属离子发酵培养基进一步优化。应用Plackett-Burman实验设计10个因素中挑选出3个主要影响因素,然后用中心组合设计实验RSM将三个因素再次优化,得到在Ca2+、Mg2+和K+的相应浓度分别为3.27mmol/l、2.35mmol/l和4.13mmol/l的时候,γ-聚谷氨酸的产量最高。3次重复实验的结果取均值51.4g/l(i.e.,51.4,51.2和51.6g/l)。 毛细管电泳间接紫外检测聚谷氨酸发酵液中的蔗糖。考察了该方法中背景缓冲液的选择及其浓度和pH值、分离电压、温度等因素对样品响应值和迁移时间的影响,获得了优化的电泳工作条件。最佳的操作条件为:以浓度为30mM、pH11.0的对氨基水杨酸作为背景缓冲液,分离电压15kV,操作温度25℃。在此条件下,电泳分离在6.661min内完成,标准曲线的线性范围为0.078g/L~20g/L、R值为0.99985、检出限为0.035g/L。最后,应用该方法精确测定出聚谷氨酸发酵过程中不同生长时期蔗糖浓度和消耗曲线。
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