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防御素抗菌谱广,对人和动物无毒副作用,具有免疫原性低、无耐药性、无残留、溶解性和热稳定性好,对高离子强度和pH变化不敏感等特点。因此,防御素具有替代传统抗生素的潜力。β-防御素是动物体内一种重要的抗菌肽,不仅有抗病毒和杀菌的作用,而且它还参与机体的免疫调节,有较高的研发利用潜力,是当前生物医学的研究热点之一。本研究以鸡β-防御素6(Gal-6)为研究对象,根据Genebank中登录的Gal-6序列合成Gal-6,构建含有Gal-6的质粒pUC57-T-Gal-6。将它和穿梭表达载体pSIP409同时进行酶切,连接构建pSIP409-Gal-6质粒,转入大肠杆菌DH5α中进行鉴定,进而将鉴定正确的质粒利用电转化技术转入乳杆菌感受态NC8中。制备重组Gal-6基因乳酸菌。通过SDS-PAGE、Western blotting方法检测Gal-6在植物乳杆菌中的表达情况,应用薄层平皿琼脂糖扩散法测定重组乳酸菌的抑菌活性。结果显示成功构建了重组质粒pSIP409-Gal-6,并利用电转化技术成功转入植物乳酸杆菌中,通过检测验证表达成功。抑菌活性实验证明Gal-6分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有一定的抑菌活性。为进一步分析重组乳酸菌的免疫保护性效果,验证Gal-6是否能增强鸡的机体免疫功能,增强抗病和抗感染能力,将构建的重组乳酸菌pSIP409-Gal-6经SppIP诱导表达后饲喂雏鸡,45只2-3周龄的雏鸡随机分成3组,每组各15只,三组分别为pSIP409-Gal-6组,pSIP409组和PBS组,以重组乳酸菌5.0×109 CFU分组口服免疫雏鸡,每只免疫计量控制为0.3ml,按以上计量进行免疫三周,第四周停止免疫,第五周再次进行免疫,免疫周期结束后对鸡翅下采血并用流式细胞术检测CD4+和CD8+T淋巴细胞。口服免疫结束2周后用致病性大肠杆菌ETEC 5.0×1010 CFU进行攻毒实验。攻菌后每天监测体重,检测各组实验鸡的体重变化。攻毒后第10天处死,取十二指肠、回肠、盲肠制作石蜡包埋组织切片,H-E染色后观察肠道病理变化。结果显示,pSIP409-Gal-6组和pSIP409组的体重丢失低于PBS组。从流式细胞仪检测结果看出,Gal-6能够增加CD4+T淋巴细胞数量,增强机体免疫力。攻毒后肠道病理切片得出,口服重组乳酸菌pSIP409-Gal-6能改善肠道病理变化。因此,将β-防御素通过乳酸菌在动物体内表达,增强动物机体抗感染能力,这对动物性食品安全和公共卫生具重要意义,对减少和替代抗生素的使用起到积极促进作用。