【摘 要】
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牛乳铁蛋白抗菌肽(bovine lactoferricin,Lfcin B,bLfcin)为牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin,bLf)在酸性胃蛋白酶作用下从其N端释放出的一个含25个氨基酸残基的抗微生物肽,对
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牛乳铁蛋白抗菌肽(bovine lactoferricin,Lfcin B,bLfcin)为牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin,bLf)在酸性胃蛋白酶作用下从其N端释放出的一个含25个氨基酸残基的抗微生物肽,对动物消化逆内的多种病原微生物具特异杀伤作用.由于以化学合成法生产足量Lfcin B的价格昂贵,为了能够生产可用于有关Lfcin B的理化和生物学特性及其在畜禽疾病防治效果等方面的研究所需的足量Lfcin B,该文对Lfcin B基因及其在毕赤酵母中表达开展了研究.试验结果表明:(1)分别以pPICZ-LfcinB和LfcinB-S/LfcinB-A为模板和引物的PCR反应,扩增得一条长约115bp的DNA片段.这证明了目标cDNA片段已成功克隆到pPICZα C上.(2)对pPICZ-LfcinB中的LfcinB基因及其上下游序列的确认分析,结果表明在pPICZ-LfcinB中的LfcinB基因的读码框正确.(3)分别以酵母转化子的基因组DNA和LfcinB-s/LfcinB-A为模板的PCR反应,扩增得一条长约115bp的DNA片段.这表明,目标cDNA片段已成功插到酵母转化子的基因组中.(4)Tricine-SDS-PAGE电泳法分析结果表明,酵母转化子表达产物的分子量与LfcinB的相近;同时,体外抑菌试验结果表明,酵母转化子表达产物粗品对大肠杆菌(E.coli.K<,12>D<,31>)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus c58000)和短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)具有抗菌活性.这表明,LfcinB基因已成功表达于毕赤酵母(Pichiapastoris)中.
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