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目的: 秦七风湿方(Qinqi Rheumatism formula,QRF)是用于治疗类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)的临床经验方,但其如何实现抗RA作用尚不清楚。本工作首先建立了秦七风湿方HPLC指纹图谱,在此基础上,分别通过动物实验和细胞实验来考察该方抗RA的作用。 方法: 1.采用Inert Sustain C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:0.1%磷酸水溶液-乙腈;检测波长:203nm;柱温:30℃;进样量:1mL·min-1;梯度洗脱,建立秦七风湿方HPLC指纹图谱,并对该方指标性成分含量进行测定。 2.采用文献中报道的方法,构建佐剂性关节炎(Adjuvant arthritis,AA)及胶原型关节炎(Collagen induced arthritis,CIA)大鼠模型,考察秦七风湿方对AA及CIA大鼠足趾肿胀度、体重以及脾脏和胸腺指数的影响。 3.通过CCK-8(Cell counting kit-8)法检测秦七风湿方对小鼠巨噬细胞活力的影响。分别采用Griess法和酶联免疫吸附法(ELISA)研究秦七风湿方对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌炎症介质一氧化氮(Nitric nxide,NO)和肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响;此外,采用CCK-8法检测秦七风湿方对人成纤维滑膜细胞(Human fibroblast-like synovicyte,HFLS)增殖的影响;最后,采用MTT法检测秦七风湿方对碘乙酸钠(Sodium lodoacetate,MIA)诱导的SW1353细胞活力降低和损伤的保护作用。 结果: 1.建立了秦七风湿方HPLC高效液相指纹图谱,共标定19个峰,通过与对照品比较,从中指认出8个指标性成分,分别为马钱苷酸、莫诺苷、龙胆苦苷、马钱苷、竹节参皂苷Ⅳa、人参皂苷Ro、F1和F2,并测定了8种指标性成分的含量。 2.体内实验结果表明:秦七风湿方能有效地改善和减轻佐剂性关节炎AA大鼠和胶原型关节炎CIA大鼠的足趾肿胀,对关节炎大鼠体重增长缓慢有明显的改善作用,有调整和恢复免疫器官脾脏和胸腺的作用。 3.体外实验结果发现,秦七风湿方能有效地抑制LPS诱导RAW264.7细胞分泌的炎症因子NO和TNF-α的释放;并且能有效地抑制HFLS细胞增殖;此外,研究还发现该方对MIA诱导的SW1353软骨细胞活力降低和损伤具有明显的保护作用。 结论: 本文建立了秦七风湿方HPLC高效液相指纹图谱,研究结果对秦七风湿方全方的质量控制具有一定的指导意义。体内实验显示该方对RA具有显著地治疗作用,体外研究表明该方可能通过抑制炎症因子分泌,抑制滑膜细胞增殖及软骨保护,实现其抗RA的作用。