肝细胞性肝癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是一种受多种因素影响并为多个基因所控制的复杂疾病，在我国乃至全世界所有恶性肿瘤的病死率中位居前列。探讨肝癌发生发展相关的因素及分子机制，寻找有助于肝癌早期诊断、转移和复发的预测的生物学标记和治疗靶标，对于疾病的诊疗及预测预后具有重要的临床意义。膜联蛋白，是一个Ca2+依赖的可与酸性磷脂结合的蛋白家族，参与机体多种正常的生理调节，在炎症反应、抗凝血以及肿瘤发生转移中发挥着重要的作用。近年的研究发现，膜联蛋白家族的多个分子参与包括肝癌在内的多种肿瘤的发生、发展存在密切的关联。其中膜联蛋白A7（synexin， AnnexinA7,ANXA7）是能使嗜铬细胞颗粒聚集的一种蛋白质，也是最早被分离出的膜联蛋白，在多种组织中存在表达。 AnnexinA7在某些激素相关的肿瘤中表现出抑制基因的特性，如前列腺癌，转移性乳腺癌，脑胶质瘤等。但对其在肿瘤发生、发展中的确切机制尚不清楚。已有的研究提示ANXA7在肝癌中异常表达，可能在肝癌的发生和发展中起重要调控作用。 AnnexinA7在肝癌中是否存在表达异常，是否与肝癌表型相关联，又在其中扮演着什么样的角色，通过调控哪些分子在肝癌中发挥作用，带着这一系列的问题我们展开了本课题的研究。首先，通过实时定量PCR的方法在48例肝癌病例样本中检测了ANXA7mRNA的表达水平，发现ANXA7在肝癌组织中表达下调,同样的结果在肝癌细胞系中得到很好的验证。通过RNA干扰的方法下调A7的表达后,发现能引起抑癌基因PTEN的表达下调。在体外生物学功能检测中发现A7能抑制肝癌细胞增殖，而对细胞迁移和凋亡作用不明显。为了寻找ANXA7在肝癌中的确切机制，我们成功构建了含有HA融合蛋白标签的A7真核表达质粒，通过免疫共沉淀的方法筛选并结合质谱鉴定寻找可能与膜联蛋白A7发生相互作用的蛋白质，结果发现胰岛素样生长因子结合蛋白2（Insulin-likegrowthfactorbindingprotein2， IGFBP2）差异存在， IGFBP2是胰岛素样生长因子(IGF)系统的成员之一，在全身多系统的多种恶性肿瘤中表达明显增高，其在肝癌病人的血清中与肝癌组织中也存在较高的表达，可能是作为一种独立的生长调节因子，通过多种途径调节细胞的增殖和侵袭。随后我们用IGFBP2特异性的抗体通过Westernblot的方法对其与ANXA7的结合加以验证。为了更好地理解两者的结合作用，我们借助细胞免疫荧光的方法分别检测了AnnexinA7与IGFBP2的细胞水平分布情况，并通过定点突变的方法证实膜联蛋白A7可通过IGFBP2的RGD位点发生特异性结合。在确定两者的结合关系后，我们通过westernblot的方法分别检测膜联蛋白A7与IGFBP2在表达关联情况，结果发现在肝癌细胞SMMC7721中上调ANXA7的表达能引起IGFBP2的表达下调，而上调IGFBP2的表达则不能影响膜联蛋白A7的表达。在对IGFBP2下游通路检测过程中发现上调IGFBP2的表达能使ERK1/2的磷酸化水平升高，而同时上调ANXA7的表达能抑制这种作用。MAPK通路是重要的信号通路，参与细胞的增殖生长和分化，并且也是IGFBP2的下游通路，我们的研究提示AnnexinA7可能参与并介导了IGFBP2通过活化ERK1/2增加MAPK活性的途径实现对细胞增殖的抑制作用。综上所述,本课题研究对膜联蛋白A7在肝细胞性肝癌的表达情况以及在肝癌细胞的生物学功能进行了检测，初步探讨了膜联蛋白A7与IGFBP2的关联关系在肝癌发生发展中的作用机制，进一步完善了膜联蛋白A7在恶性肿瘤中的机制研究，可能为肝癌的靶向治疗提供潜在的治疗分子。