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黄曲霉毒素B1和桔青霉素属于真菌毒素,是由曲霉属、青霉属等真菌在生长过程中产生的一类次级代谢产物。通过污染谷物及动物性食品进入食物链,进而危害人类的肝脏和肾脏,对人类健康和国家安全构成了潜在的巨大威胁。研究制备同时检测黄曲霉毒素B1和桔青霉素的胶体金免疫层析技术,是快速检测生物毒素的主要发展趋势。本课题的主要研究内容和结论如下：1.分别通过N-羟琥珀酰亚胺酯法合成黄曲霉毒素B1人工抗原和活性酯法合成桔青霉素人工抗原。首先对合成的黄曲霉毒素B,半抗原和桔青霉素半抗原,通过紫外光谱法和高效液相色谱-质谱联用法进行分析表征,确定半抗原合成成功；采用可见分光光度法对偶联后的全抗原扫描鉴定,确定半抗原与载体蛋白偶联成功,并测定得到黄曲霉毒素B1人工抗原和桔青霉素人工抗原的偶联比分别为5.13：1和7.2：1。2.采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,通过试验确定了胶体金标记的最适pH为添加了20μL/ml的0.1mol/L K2CO3溶液,最适抗体蛋白的用量为60μg/ml。分别用胶体金标记抗AFB1单克隆抗体和抗CIT单克隆抗体,制备了AFB1和CIT的免疫胶体金探针,并通过斑点金免疫渗滤实验证明了金标探针具有免疫活性。3.将AFB1人工抗原和CIT人工抗原作为包被抗原,分别固定在硝酸纤维素膜的检测线T1和检测线T2,将羊抗鼠二抗包被于硝酸纤维素膜上,作为质控线C线,组装了同时检测AFB1和CIT的胶体金免疫层析试纸条。初步探索试验条件,确定了制备试纸条的各个参数,对金标抗体的稀释液配方和稀释度数进行优化,并调试和确定,T1线上的AFB1包被抗原、T2线上CIT包被抗原以及C线上的二抗的最佳浓度。4.组装成试纸条后,对试纸条的各项指标进行优化。分别对系列浓度的AFB1和CIT标准液进行检测,确定试纸条的检出限为5ng/ml和50ng/ml。该试纸条对AFTB2、M1、玉米赤霉烯酮、伏马菌素等结构类似物无交叉反应,硅胶干燥后,4℃密封冷藏可保存三个月以上。5.试纸条同时快速检测两种毒素,灵敏度高,特异性强,操作简单方便,可用于现场的大批量快速检测。本研究为同时快速检测多种毒素的试纸条的研究奠定了基础。