基于微悬臂阵列对核酸适配子与生物分子相互作用力的研究及其检测

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本论文基于微悬臂阵列研究分子间相互作用力,从而达到检测的目的。详细研究了单链结合蛋白(SSBP)和单链DNA (ssDNA)的相互作用;研究了土霉素(OTC)特异性适配子(OTC-Aptamer)与OTC的相互作用;研究了凝血酶特异性适配子与凝血酶的相互作用。主要内容如下:1、将ssDNA (5’-HS-(CH2)6-T7o-3’)通过Au-S共价键合到悬臂表面,在流动体系中研究ssDNA与SSBP的相互作用过程。研究发现悬臂的偏转程度与SSBP的浓度有关,SSBP的浓度越高其与ssDNA的相互作用过程越快,所诱导的悬臂程度偏转也越大;当通入牛血清蛋白及溶菌酶等非特异性蛋白时悬臂则不产生明显的偏转。实验结果表明ssDNA修饰的悬臂对SSBP有较宽响应范围,最低响应浓度为0.008μgmL-1。2、利用微悬臂阵列传感器在流动体系中研究OTC特异性适配子(5’-GGA ATT CGC TAG CAC GTT GAC GCT GGT GCC CGG TTG TGG TGC GAG TGT TGT GTG GAT CCG AGC TCC ACG TG-(CH2)6-SH-3’)与OTC的相互作用,从而对OTC进行检测。实验结果表明OTC的浓度越高所引起的悬臂偏转程度越大。但与OTC的结构极为相似的四环素,强力霉素等物质则不能引起悬臂的明显偏转。用高浓度的NaCl对已经与OTC结合的悬臂表面进行处理后,该微悬臂阵列仍表现出较强的响应,具有较好的重复性。适配子修饰的微悬臂阵列是一个很好的OTC传感器,具有较高的灵敏度和选择性,检测限能达到0.2nM。3、将凝血酶特异性的适配子(5’-SH-(CH2)6-GGT TGG TGT GGT TGG-3’)通过Au-S共价键合到悬臂表面,在流动体系中研究凝血酶与凝血酶特异性的适配子的相互作用力及其作用过程。与传统的检测方法不同,微悬臂检测技术是一种免标记的检测手段,并可实时获得凝血酶和DNA适配子相互作用实验信息。实验结果显示微悬臂阵列是一种具有高度特异性和灵敏度的凝血酶检测方法。
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