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背景急性肝损伤(acute liver injury,ALI)是一种与肝功能急剧下降有关的临床综合征。虽然有不同的保肝药物可用于治疗,但其发病率和死亡率仍然很高。骨髓来源的间充质干细胞在肝损伤中已经证明了具有部分保护作用。子宫内膜再生细胞(endometrial regenerative cell,ERC)是从月经血中分离出来的一种新型成人间充质干细胞。此外,ERCs之所以成为有吸引力的候选者,是因为它们与其他来源的干细胞相比具有重要优势,包括在特定应激条件下提高增殖率和旁分泌反应。先前的研究也证实ERCs在体外和体内具有独特的免疫调节特性,以及在体外分化成有功能的肝细胞样细胞的能力。考虑到这些原因,当前研究的目的在于探讨ERCs对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的抑制作用。目的利用四氯化碳腹腔给药方法建立小鼠急性肝损伤模型,研究女性月经血来源的子宫内膜再生细胞在肝损伤中的抑制作用及机理。方法通过腹腔注射CCl4给药的方法诱导出C57BL/6小鼠急性肝损伤模型。简单来说,将18只小鼠随机分为3组,6只/组,分组如下:(1)正常对照组(Normal control group):小鼠首先经腹腔注射玉米油,30min后经尾静脉注射200ul PBS;(2)急性肝损伤组(Untreated group):经腹腔注射单剂量的CCl4用于诱导急性肝损伤,30min后经尾静脉输注200ul PBS;(3)ERC治疗组(ERC-treated group):小鼠在腹腔注射CCl4 30min后,经尾静脉注射1×106 ERCs(传代培养4次后,细胞重悬于200ul PBS中)。小鼠腹腔注射CCl4 24小时后,生化,病理和免疫组织学参数被评估,细胞追踪被检测,并通过测定全身和局部促炎和抗炎细胞因子水平以及运用流式细胞术检查特异性淋巴细胞亚群的反应。结果:1.通过Ficoll-Paque密度梯度离心分离、获取ERCs。光镜下,可见ERCs具有典型的纺锤体形状,倍增时间约24小时。此外,在原代与传代培养过程中分别可见细胞集落样形成及90%细胞融合成漩涡状排列。2.与Normal control组相比,Untreated组小鼠血清ALT与AST水平均显著升高,p<0.01;与Untreated组相比,ERC-treated组血清ALT与AST水平均明显降低,p<0.01。3.与Normal control组相比,Untreated组小鼠肝脏肿胀,呈黄白色,体积增大。HE染色示:大量炎症细胞浸润、血窦充血和出血,以及广泛的肝细胞坏死;少量残存的肝细胞和肝细胞胞质肿胀。相比之下,ERC-treated组小鼠肝脏水肿明显减轻,颜色暗红,体积减少。HE染色示:少量炎性细胞聚集,血窦充血和出血均显著减轻,肝细胞坏死面积变小,肝实质性细胞水肿减轻等。4.免疫组化分析显示:与Untreated组相比,ERC-treated组小鼠肝脏中PCNA阳性染色细胞的数量显著增加,p<0.01。另外,与Normal control组相比,Untreated组小鼠肝脏中Ly6G阳性细胞数量明显增多,p<0.01;与Untreated组相比,ERC-treated组中Ly6G阳性细胞数量明显减少,p<0.01。5.酶联免疫吸附试验表明:与Normal control组相比,Untreated组肝脏局部和血清中促炎因子IL-1β,IL-6和TNF-a表达水平均明显提高,而抗炎因子IL-10水平显著降低,P<0.01,差异具有统计学意义。相比之下,这些抗炎细胞因子水平在ERC-treated组明显降低,而IL-10则显著上升,差异有统计学意义。6.细胞追踪试验结果证实:荧光显微镜检测到PKH-26标记的ERCs进入了受损的肝脏组织和淋巴器官-脾组织中。此外,也发现标记的ERCs主要堆积在肺中,然而在正常的肾脏中却没有发现染色细胞。7.流式细胞结果显示,与Normal control组相比,Untreated组脾脏中CD11c+MHCII+DCs百分比明显升高,p<0.01;但是在ERC注射后CD11c+MHCII+细胞的数量显著降低,p<0.01。8.与Normal control组相比,Untreated组脾脏中T细胞亚群比例均显著提高,p<0.01;与Untreated组相比,ERC-treated组中CD3+CD4+与CD3+CD8+T细胞比例均明显下降,p<0.01。9.与Normal control组相比,Untreated组小鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比下调,p<0.01。相比之下,ERC-treated组中CD4+CD25+Foxp3+Treg比例在ERC-treated组均显著上调,p<0.01。结论:1.成功利用小鼠急性肝损伤模型,证实ERCs能够有效降低AST及ALT水平,改善肝功能,减轻肝脏病理损伤。2.ERCs保护脏肝组织与通过增加PCNA阳性细胞数量,促进肝细胞增殖有关。3.ERCs抑制肝损伤与减少LY6G阳性中性粒细胞浸润密切相关。4.ERCs通过降低体内促炎细胞因子IL-6,IL-1β和TNF-a以及提高抗炎细胞因子IL-10水平,从而调节炎症反应,参与肝损伤修复。5.体内追踪实验表明,ERCs可快速迁移、分布、进入受损的肝脏组织中,此外,其还可以聚集在肺组织中;同时还发现更多的荧光标记的ERCs进入脾脏中。6.ERCs抑制肝损伤与降低脾脏组织中的CD11c+MHCII+细胞数量有关。7.ERCs缓解肝损伤与下调脾脏CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞比例有关。8.ERCs能够通过加速脾脏Tregs细胞产生,提高其所占百分比,进而抑制肝损伤及促进肝组织修复。