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目的：用亲和层析分离法从广西眼镜蛇毒中纯化神经生长因子(nerve growth factor，NGF)，以期缩短NGF的纯化周期，提高NGF得率；并探讨NGF对人肿瘤细胞的生长抑制作用。
方法：(1)粗蛇毒采用Sephadex G75凝胶过滤及CM Sepharose CL-6B阳离子交换柱进行分离纯化；用双相免疫扩散法和PC12细胞测定各洗脱峰的活性，再用SDS-PAGE鉴定有NGF活性的洗脱峰的纯度和相对分子质量。(2)取达电泳纯的NGF免疫家兔获得抗血清，用硫酸铵沉淀法初步纯化抗血清IgG，再用HiTrap rProtein A FF柱进一步纯化，将纯化的IgG与CNBr-activated Sepharose 4 Fast Flow偶联，采用亲和层析法对广西眼镜蛇毒NGF进行分离纯化。(3)采用MTT法，以NGF浓度分别为7.5，15，30,60,120mg/L处理4种人肿瘤细胞(人肝癌细胞株BEL-7404、人舌鳞癌细胞株TCA-8113、人胃癌细胞株MGC-803和SGC-7901)作用24h，观察不同浓度NGF对4种人肿瘤细胞的毒性和生长抑制率。(4)采用AO/EB双重染色法，NGF浓度分别为25，50，75mg/L，观察不同浓度NGF作用后MGC-803细胞的染色及形态变化。(5) Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测MGC-803细胞的凋亡率。
结果：(1)用亲和层析分离法成功地从广西眼镜蛇毒中纯化出NGF，产物经过SDS-PAGE检测呈一条带，其相对分子质量约为23000，PC12细胞检测显示了良好的生物学活性。(2)NGF对4种人肿瘤细胞均有细胞毒性作用，且呈剂量依赖关系，尤其是对MGC-803和BEL-7404的抑制作用更强，作用24h的IC50值分别为48.9mg/L和55.46mg/L；荧光显微镜下可观察到MGC-803凋亡细胞的主要特点为：细胞体积缩小，染色质固缩，橘红色荧光增强；流式细胞仪检测到MGC-803细胞的早期凋亡率随NGF浓度的增高而增加，各浓度组与对照组的早期细胞凋亡率比较有明显差异(P<0.01)。
结论：(1)亲和层析法分离NGF比传统分离方法要简单得多，只需一步即可完成反应，大大缩短了NGF的纯化周期，提高了NGF的得率。该方法为NGF的大量提取提供了技术支持。(2)NGF对4种人肿瘤细胞均有细胞毒性和生长抑制作用，对MGC-803和BEL-7404的作用更显著，诱导细胞凋亡可能参与了其作用机制。