论文部分内容阅读
目的:探索在自限性自身免疫性疾病介导的中枢神经系统急性炎症过程中IL-17的神经保护作用及其相关机制。方法:用感光细胞间维生素A类结合蛋白(IRBP)免疫纯系的Lewis大鼠,建立急性-单向型EAU模型。应用Real-time PCR的方法检测在急性-单向型EAU进展过程中多种效应T细胞相关分子和神经营养因子的相对表达,免疫组化和荧光双染的方法检测在视网膜内IL-17的表达,在疾病的后期拮抗IL-17的作用,用免疫组化的方法检测拮抗IL-17的作用后视网膜内IL-17的表达和疾病的恢复情况;Tunel的方法检测神经元的凋亡情况。用PMA/Ionomycin刺激大鼠的外周血单个核细胞产生的炎性上清模拟体内含高水平IL-17的炎性环境,利用这种炎性上清刺激原代培养的小脑神经元,Tunel和LDH方法检测小脑神经元的凋亡和坏死,激光共聚焦显微镜检测刺激后原代培养的神经元细胞内Ca2+浓度。Western blotting方法检测在炎性上清刺激下,星形胶质细胞内信号通路的变化。ELISA方法检测炎性上清和星形胶质细胞活化后的上清中IL-17和其他细胞因子的水平。结果:在Lewis大鼠诱导的急性-单向型实验性自身免疫性葡萄膜炎动物模型的体内实验中证实,局部呈现含高水平IL-17的炎性环境,同时视网膜内的星形胶质细胞也能分泌IL-17。在疾病的后期拮抗IL-17的作用,能干扰疾病的恢复并且导致神经细胞的凋亡。IL-17在神经炎症的活动期具有维持稳态和神经保护的动态作用。在体外用炎性上清刺激原代培养的小脑神经元,导致小脑神经元发生大量凋亡,然而在星形胶质细胞存在的条件下,可以显著地抑制神经元的凋亡。活化后星形胶质细胞产生的上清,特别是含高水平IL-17的上清,保护效果最明显,而IL-17中和抗体可以抑制活化后星形胶质细胞上清对神经元的保护作用。在炎性上清刺激下,IL-17能抑制神经元细胞内钙的增加并且保护神经元抵抗凋亡。含高水平IL-17的炎性上清通过活化JAK/STAT通路,促进星形胶质细胞分泌IL-17,但炎性上清中的IFN-γ没有这种作用。单独用IL-17刺激星形胶质细胞或者长期应用炎性上清刺激星形胶质细胞,不能产生足够的IL-17。结论:IL-17在急性神经炎症活动期具有维持稳态和神经保护的作用。