论文部分内容阅读
目的:通过采用超声内镜下细针穿刺活检能够为胰腺囊性肿瘤的诊断提供直观的第一手资料,对肿瘤中发生基因突变的改变、蛋白质糖基化改变的进行初步的检测。方法:本实验主要分四部分进行:1.按病理类型将课题入组的胰腺囊性肿瘤患者分为高危组与低危组,选用多因素logistic回归分析低危组与高危组临床数据。2.对胰腺囊性肿瘤囊液进行DNA提纯,分析所选取的热点突变基因KRAS、GNAS、CTNNB1、BRAF在各类型中的突变情况。3.分析两大类型的胰腺囊性肿瘤,浆液性囊腺瘤与黏液性囊腺瘤囊液中蛋白质糖基化的变化情况:凝集素芯片技术比较浆液性/黏液性囊腺瘤囊液糖蛋白糖链谱。4.通过存在差异的凝集素富集,LC-MS/MS分析比较来自(N-linked)蛋白质肽段;完成蛋白质鉴定、通过生物信息学注释,及String蛋白相互作用图,寻找参与黏液性胰腺囊性肿瘤改变的通路和关键蛋白。结果:1.肿瘤的最长径≥2.5cm,主胰管≥5mm考虑为胰腺囊性肿瘤的危险因素。通过非参数秩和检验,囊液的CEA, CA19-9,CA72-4在低危组与高危组存在明显差异,结果显示脂肪酶≥1038.05ng/ml时,CEA≥10.33ng/ml时,诊断高危胰腺囊性肿瘤准确率为78.4%,有72.2%的敏感性和82.1%的特异性。2. 3例IPMN病例中其中1例KRAS基因12、13位点密码子的突变激活,Gly12CysGGT>GTT,病理:胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN),部分上皮轻-中度不典型增生。10例MCN病例中其中1例CTNNB1突变热点为编码区:32/33/34/37密码子,34位点GGA>CGA,37位点TCT>TCC,病理:胰腺(体尾部)黏液性囊腺瘤伴轻度不典型增生。基因突变检测可对胰腺囊性肿瘤的恶变起辅助诊断的意义。3. 6种凝集素(如STL、WGA、BPL、DBA、PTL-I、MAL-Ⅰ)识别糖链分别在胰腺囊性肿瘤中表达上调或下调。4.通过String蛋白相互作用分析,主要涉及代谢通路,PI3K-ATK 通路(YWHAZ,YWHAG,YWHAQ,LAMC1),处于交叉点核心的蛋白 YWHAZ,YWHAG,YWHAQ, ACTB, SPA5, S100A11均属于关键蛋白是参与黏液性胰腺囊性肿瘤改变的关键蛋白。结论:通过多个维度的对胰腺囊性肿瘤进行客观的诊断分析,研究胰腺囊性肿瘤相关糖蛋白糖链的变化,有助于寻找灵敏度和准确度更高的肿瘤标志物,进一步揭示胰腺囊性肿瘤进展的糖生物学机制并为研发新的治疗方法提供有价值信息。