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目的:从体内、体外实验明确双氢杨梅树皮素(Ampelopsin,APS)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤的保护作用,并阐明发挥作用的可能机制。方法:(1)急性肺损伤动物模型的研究取健康KM种小鼠随机分为9组,每组6只雌雄各半,随机分组,采用正交分析三因素设给药时间、给药浓度、染毒方式。取肺组织检测髓过氧化物酶(MPO)活性、湿/干重测定、肺系数测定。(2)APS对LPS诱导小鼠急性肺损伤炎症的影响取健康KM种雄性小鼠随机分为空白对照组、LPS模型组、地塞米松阳性组、APS高剂量组、APS中剂量组、APS低剂量组,以不同浓度APS连续给药3d到第3d给药之后立即用脂多糖腹腔注射方法造模,实验期间观察小鼠一般状态、记录体重变化情况。8h后取血分离血清检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平变化、取肺组织检测髓过氧化物酶(MPO)活性检测;湿/干重测定;肺系数测定、病理学观察。(3)APS对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的氧化应激影响取健康KM种雄性小鼠随机分为空白对照组、LPS模型组、维生素E阳性组、APS高剂量组、APS中剂量组、APS低剂量组以不同浓度APS连续给药3d到第3d给药之后立即用脂多糖腹腔注射方法造模。实验期间观察小鼠一般状态、记录体重变化情况。8h后取肺组织检测T-AOC活力、MDA含量、SOD活力。(4)APS对LPS诱导的人肺泡上皮细胞A549细胞的影响MTS法检测不同浓度、不同时间点LPS对A549细胞增值率的影响,选取最适时间点和浓度作为造模条件;MTS法检测不同浓度、不同时间点APS对A549细胞的毒性作用,选取适合时间点和浓度作为预给药条件;检测APS对LPS诱导肺泡上皮细胞A549细胞TNF-α、IL-1β水平的影响。结果:(1)急性肺损伤动物模型的研究结果显示:肺系数:雌雄与空白组一起比较,试验8升高肺系数,加重肺水肿程度(P<0.05)。单独雌性与空白比较,试验1-9并不能升高肺系数(P>0.05)。单独雄性与空白比较,试验8升高肺系数,加重肺水肿程度(P<0.05);湿干比:雌雄与空白组一起比较,试验3、8能降低干湿比,加重肺水肿程度(P<0.05或0.01)。单独雌性与空白比较,试验8、9能降低干湿比,加重肺水肿程度(P<0.05)。单独雄性与空白比较,试验3、8能降低干湿比,加重肺水肿程度(P<0.05)。MPO活力测定:雌雄与空白组一起比较,试验1、9并不能升高MPO活力(P>0.05)。单独雌性与空白比较,试验2、5能升高MPO活力,加重肺损伤程度(P<0.05)。单独雄性与空白比较,试验4、7、8、9升高MPO活力,加重肺损伤程度(P<0.05)。(2)APS对LPS诱导小鼠急性肺损伤炎症的影响结果显示:小鼠一般情况观察:(1)空白组小鼠双目有神,体格健壮,营养良好,背毛柔顺有光泽,耳廓及四肢颜色呈淡红色,反应灵敏,呼吸音清晰,呼吸平稳,进食及饮水正常,体重呈时间进行性增长,实验期间无动物死亡。(2)LPS模型组小鼠目光呆滞,背毛蓬松直立无光泽,伴有脱落现象,耳廓及四肢颜色呈暗红色,反应迟钝,不喜活动,常见气喘、气急、咳嗽,有一只死亡。(3)地塞米松阳性组小鼠目光略呆滞,背毛微蓬松直立,体重减轻,反应迟钝,偶见气喘等,有扎堆现象。(4)APS高剂量组小鼠目光略呆滞,背毛微蓬松直立,体重增加,偶见气急,有扎堆现象。(5)中剂量组小鼠目光有神,背毛微蓬松但有光泽,体重增加,活动灵敏。(6)低剂量组小鼠目光微呆滞,背毛有脱落现象,体重增加缓慢,伴有咳嗽、气急、气喘,有扎堆现象;病理形态:空白组小鼠肺泡结构正常,肺泡结构完整,间隔无增厚。模型组结构完整性差,肺泡壁重度增厚,肺泡腔狭小,肺间质中可见有大量的中性粒细胞,肺实质病变。APS低剂量组较模型组损伤程度有所减轻;MPO活力测定:APS组能使小鼠肺组织中MPO活力降低,减少中性粒细胞释放(P<0.05),APS低剂量差异显著(P<0.01);肺系数:APS中、低剂量能降低肺系数,减轻肺水肿(P<0.05),APS中剂量组差异显著(P<0.01),阳性组也表现出相同的效果;湿/干比:APS高中剂量均能降低肺系数,减轻肺水肿(P<0.05),APS低剂量组差异显著(P<0.01),阳性组也表现出相同的效果;TNF-α含量水平测定:APS中剂量能降低血清TNF-α含量水平,减轻炎症损伤(P<0.05);IL-1β含量水平测定:APS中剂量能显著降低血清IL-1β含量水平,减轻炎症损伤(P<0.05)。(3)APS对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的氧化应激影响结果显示:小鼠一般情况观察:(1)空白组小鼠双目有神,体格健壮,营养良好,背毛柔顺有光泽,耳廓及四肢颜色呈淡红色,反应灵敏,呼吸音清晰,呼吸平稳,进食及饮水正常,体重呈时间进行性增长,实验期间无动物死亡。(2)LPS模型组小鼠目光呆滞,背毛蓬松直立无光泽,伴有脱落现象,耳廓及四肢颜色呈暗红色,反应迟钝,不喜活动,常见气喘、气急、咳嗽等。(3)维生素E阳性组小鼠目光略呆滞,背毛微蓬松直立,体重呈时间进行性增长,反应迟钝,偶见气喘等,有扎堆现象。(4)APS高剂量组小鼠目光略呆滞,背毛微蓬松直立,体重增加,偶见气急,有扎堆现象。(5)中剂量组小鼠目光有神,背毛微蓬松但有光泽,体重增加,活动灵敏。(6)低剂量组小鼠目光微呆滞,背毛有脱落现象,体重增加缓慢,伴有咳嗽、气急、气喘,有扎堆现象;T-AOC活性测定:APS低剂量能增加肺组织T-AOC活性,提高抗氧化能力(P<0.05),维生素E阳性组也表现出相同效果;MDA含量测定:APS中低剂量均能降低肺组织MDA含量,提高抗氧化能力(P<0.05),维生素E阳性组也表现出相同效果。SOD活力测定:APS高中剂量减弱SOD活力(P<0.05);LC3B蛋白表达的测定:模型组能增强LC3B表达,增加自噬水平(P<0.05),APS高剂量组能减弱LC3B的表达,减弱自噬水平(P<0.05)。(4)APS对LPS诱导的人肺泡上皮细胞A549细胞的影响:(1)LPS对肺泡上皮细胞A549细胞增值率的影响:LPS处理2h,与0μg/m L对照组比较,LPS 150μg/m L细胞存活率上升(P<0.05);LPS处理4h,与0μg/m L对照组比较,LPS(25、50、100、150μg/m L)4个浓度对细胞存活率没有影响(P>0.05);LPS处理8h,LPS150μg/m L细胞存活率下降(P<0.05);LPS处理16h,与0μg/m L对照组比较,LPS(25、50、100、150μg/m L)4个浓度对细胞存活率没有影响(P>0.05);(2)APS对肺泡上皮细胞A549细胞毒的影响:APS处理2h,与0ng/m L对照组比较,(7.8125、15.625、62.5、500 ng/m L)对肺泡上皮细胞A549细胞的细胞增值率有升高作用(P<0.05);APS处理4h,与0ng/m L对照组比较,1000ng/m L对肺泡上皮细胞A549细胞的增值率有明显降低作用(P<0.01);APS处理8h,与0ng/m L对照组比较,(7.8125、15.625ng/m L)对肺泡上皮细胞A549细胞的增值率有明显升高作用,1000ng/m L对肺泡上皮细胞A549细胞的增值率有明显降低作用(P<0.01);APS处理16h,与0ng/m L对照组比较,(500、1000ng/m L)对肺泡上皮细胞A549细胞的增值率有降低作用,其中1000ng/m L降低作用显著(P<0.05或0.01)。(3)APS对LPS诱导的肺泡上皮细胞A549细胞TNF-α释放的影响:与单纯LPS处理组比较,不同浓度APS预处理组,炎症因子TNF-α含量水平下降(P<0.05或0.01)。(4)APS对LPS诱导的肺泡上皮细胞A549细胞IL-1β释放的影响:与单纯LPS处理组比较,3.90625、15.625、31.25、62.5ng/m LAPS预处理组,炎症因子IL-1β含量水平下降(P<0.05或0.01)。结论:APS对LPS诱导的急性肺损伤具有保护作用,其机制可能是通过减轻氧化应激损伤和减少的细胞自噬而实现的。