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本研究的目的就是从不同种类的昆虫中克隆获得有活性的抗冻蛋白基因同时进行抗冻蛋白基因表达及其产物的基本活性分析。
研究工作首先根据GenBank上已发表的黄粉虫的抗冻蛋白基因,设计了6对引物,经RT-PCR,扩增出黄粉虫抗冻蛋白基因。再利用3’RACE的方法,结合已发表的赤翅甲和黄粉虫抗冻蛋白基因及本实验室得到的小胸鳖甲抗冻蛋白基因设计了2条简并引物分别用于扩增洛氏脊漠甲和戈壁琵琶甲的核心和全长序列。
本文为进一步检测抗冻蛋白的功能,鉴定正确表达的菌落,大量诱导后,超声裂解细胞,用谷胱苷肽琼脂糖珠亲和纯化。利用本室已经制备的赤翅甲抗冻蛋白的鼠抗血清,作Westernblot分析。通过细菌的低温抗冻保护实验证明,抗冻蛋白已经丧失功能,与报道的植物抗冻蛋白具有热稳定性不同的结论。