第一部分DCD供肝热缺血时间对胆道损伤的实验研究目的：目前,我国肝移植多使用心源性死亡(DCD)供肝,并正在大力推广医院内DCD供体捐献工作。因此,DCD供体是我国当今和未来临床移植中的主要器官来源,即不可避免存在其特有的热缺血学损伤问题。其中,热缺血损伤导致的胆道病变是困扰肝移植的一大难题,严重影响患者的长期生存率及生活质量。有关供肝热缺血安全时限的研究多侧重于对肝细胞及肝功能的影响,而关于胆道热缺血损伤的研究较少,特别是对大鼠DCD供肝热缺血时间与胆道的病理学改变及其并发症关系研究,至今报道尚少,而这对于进一步深入研究DCD供肝热缺血损伤及预测肝脏移植术后胆道并发症的发生率有重要的意义。本实验旨在探讨大鼠DCD供肝不同热缺血时间与胆道损伤之间的关系。实验分组：采用无肝素化的大鼠DCD供体肝移植模型,按供肝的热缺血时间分为0min(WO),10min(w10),15min(Wl5)、30min (W30)4组,每组20只大鼠。于规定时间段取汇管区组织病理检测,及下腔静脉取血行生化检测。观察指标：动态观察大鼠胆道病理改变及肝功能指标。统计学方法：：所有数据用SPSS13.0统计软件分析。计量资料用t检验。结果：供肝热缺血小于10min时,胆道病理改变较轻且为可逆性改变；供肝热缺血时间为30min时,术后胆道病理改变较重且为不可逆性改变；结论无肝素化的大鼠DCD供肝热缺血时间超过30min时,移植术后胆道损伤明显,可导致不可逆改变。第二部分心脏死亡供体热缺血再灌注损伤对肝移植术后胆道的影响材料与方法：供体不进行肝素化(因为这更符合我国心脏死亡供体来源的特点。此外,国外利用DCD供体的肝移植经验表明,在撤除生命支持系统之前静脉注射一定量的肝素能有效降低肝移植术后胆道狭窄的发生)。利用血管夹钳夹心、脏基底部的方法建立心脏死亡热缺血模型。实验动物随机分为三组：SO组,假手术组,作为正常对照；W0组,即供肝无热缺血组；W10组,即供肝热缺血时间为10分钟。W30组,即供肝热缺血时间为30min。在肝移植供肝再灌注3h、12h、1d、3d、7d后分别留取肝脏组织和血清标本。每一组每个时间点6对大鼠。比较两组手术情况、及术后并发症情况。检测血清ALT、GGT及TBIL水平。HE染色,光镜下观察汇管区炎症细胞浸润及胆管结构破坏程度,并进行半定量评分和比较。统计汇管区胆管数、血管数、伴有血管的胆管数、不伴有血管的胆管数及孤立的血管数。结果：两组各手术主要步骤所需要的时间不存在统计学差异。W10组肝动脉栓塞及胆道梗阻的发生率较WO增多。W30组肝动脉栓塞及胆道梗阻发生率较高。肝移植术后WO及W10组ALT在术后6小时达到最高峰,并且均在术后1周之内恢复正常。但是W10组GGT和TBIL在术后第3天达到最高值,分别到术后第30天和第14天才降至正常。W30组ALT、GGT、TBIL均呈持续性升高。W10组胆管结构破坏程度和炎症细胞浸润程度较w0组明显加重,且持续时间更长。W30组胆管内皮不连续,内皮细胞肿胀明显,呈不可逆性损伤。HE染色显示术后第7天W10组汇管区纤维化较WO组明显加重。W30组呈明显纤维化增生,疤痕组织形成。电镜显示：W10组0小时除可见胆管上皮细胞和血管内皮细胞线粒体轻度肿胀外,还可见PBP内微血栓形成。再灌注后血管内皮细胞的肿胀,溶解,坏死,凋亡逐渐加重,特别是管腔内有微血栓形成的血管的内皮细胞破坏更严重。W0组术后早期汇管区血管数量未见明显减少,不伴有血管的胆管数量在术后24小时达到最高值,此后随着汇管区血管的形成,不伴有血管的胆管数逐渐减少。而W10术后早期汇管区血管数和伴有血管的胆管数(即胆管/血管单位)较WO组和正常肝脏均明显减少。W10组肝移植术后24小时汇管区胆管增生,汇管区胆管数逐渐增加,但是直到术后第7天汇管区血管数量却一直增加缓慢。W10组术后24小时和术后第3天汇管区的血管数量均明显少于W0组相应时间点和正常肝脏汇管区血管数量。到术后第7天汇管区的血管仅恢复到与正常肝脏组织类似的水平。这导致了汇管区伴有血管的胆管数量持续低于wO组相应时间点和正常肝脏组织水平,而不伴有血管的胆管数量却随着胆管的增生持续增加。W30组术后汇管区血管数量明显减少,3d后少量汇管区胆管增生,但直到术后7天汇管区胆管增生缓慢。结论：1.BEC是易受热缺血再灌注损伤的一个细胞群体,热缺血再灌注损伤导致肝移：植术后胆道梗阻发生率增加。2.PBP内微血栓形成,加重了血管内皮细胞损伤和血管功能丧失,并最终导致BEC遭受再次热缺血,加重了BEC损伤。3.热缺血再灌注损伤修复过程中PBP再生明显滞后于胆管再生使再生胆管持续处于缺血状态,不能发挥正常生理作用。4.胆管易受热缺血再灌注损伤的原因可能是热缺血再灌注时PBP微血栓形成,引起血管内皮细胞损伤加重,导致胆管微循环障碍,以及PBP再生明显滞后于胆管再生。