军团菌病首发于1976年的美国一次军人聚会，1978年国际上正式将该病原体命名为嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)。由军团菌引起的以肺炎为主要表现的急性传染病称为军团菌病。重症病例病程进展快，病死率高，在公共卫生上意义重大，日益受到人们的关注。我院于2010年2、3月间成功处理一起某训练基地的反季节流行、临床罕见的军团菌病爆发事件。经流行病学调查，认为该事件为在冬季阴冷气候下，因太阳能热水器储水罐污染血清1型嗜肺军团菌(Lp1)导致，其中住院病例34例，由于救治及时，实现了零死亡率。本研究分两部分，第一部分针对该事件进行流行病学调查；第二部分建立了一种可同时区分军团菌属和嗜肺军团菌的TaqMan探针PCR检测技术。　　第一部分一起军团菌爆发事件的流行病学调查　　目的：我院成功诊治一批反季节流行的军团菌肺炎患者，就该爆发事件的疫情特点及血清流行病学方面展开研究，以期能够为军团菌病的流行病学研究提供一些有益的线索。　　方法：　　1对该单位所有患者及接触者进行了现场回顾性流行病学调查。　　2采集患者急性期及恢复期血清、本单位在岗人员血清、及自然人群血清，用酶联免疫法查IgM抗体，阳性者用微量凝集法对抗原成分进行进一步检测。　　3了解该单位供水情况，采集该单位多点环境水样，进行分离培养。　　4整理住院患者临床病历资料。　　5应用流行病学方法，对上述资料进行整理分析。　　结果：　　1本单位在岗人员中军团菌血清IgM抗体阳性率较自然人群有显著差异。经微量凝集法检测，认为本次流行为Lp1感染所致。　　2从太阳能热水器储水罐流出口水样、淋浴喷头水样中均分离出Lp1，活菌计数为100 to150 CFU/mL，与患者血清抗体检测结果相符，其余水样均为阴性。本单位2周内于浴室淋浴人群与未淋浴人群发病率差异十分显著，P=0.002，故本次爆发可能与淋浴气溶胶传播有关。　　334例住院患者均表现为发热，多可见畏寒、咳嗽、胸闷胸痛、纳差、腹痛等症状，部分伴有乏力、头痛、肌痛等。一般实验室检查不典型。肺部病变多跨叶侵犯，形成小斑片状散发的多形性渗出性病变。患者症状改善明显早于影像学改变。　　4治疗上对首批患者分组实验性治疗，发现左氧氟沙星疗效好，随后发病的所有患者均给予左氧氟沙星治疗，部分患者加用阿奇霉素或利福平，所有患者预后良好。对可疑人群中体温达到37℃者，积极给予预防性治疗，有效减少了发病率。　　结论：　　1本次反季节流行的军团菌病事件，经流行病学调查，认为可能与太阳能储水罐污染Lp1，通过浴室气溶胶传播有关。未发现人-人传播。　　2军团菌病临床症状及一般实验室检查不典型，易误诊。患者症状改善明显早于影像学改变。　　3军团菌可以使正常身强体壮的人患病，如干预及时，抗生素应用得当，预后良好，甚至可不出现临床症状。　　第二部分军团菌TaqMan探针PCR检测技术的建立　　目的：建立一种特异、快速、敏感的，能同时检测军团菌属和嗜肺军团菌的TaqMan探针荧光定量PCR方法，并用于检测临床和环境样品。　　方法：利用军团菌属特异性23S rRNA基因和嗜肺军团菌种特异性mip基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针，两条探针5端均标记FAM，3’端标记TAMRA。提取Lp1标准菌株DNA，扩增出DNA目的片段，构建含有目的基因序列的质粒作为标准阳性模板。优化了荧光定量PCR反应条件和反应体系，并对军团菌、嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其它细菌进行检测，验证该方法的特异性、敏感性、重复性。选取部分环境及临床标本进行检测。　　结果：　　1根据军团菌属23SrRNA基因和嗜肺军团菌mip基因的保守序列，设计出特异性引物和TaqMan探针，构建了标准质粒pUC-Lp-23S和pUC-Lp-mip，建立了一种军团菌荧光定量PCR检测方法。　　2该方法检测灵敏度达10copies/反应标准质粒载量，优于普通PCR检测，具有高度特异性、重复稳定性。从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右。　　3对35份环境水样进行了检测，检出3株嗜肺军团菌和3株非嗜肺军团菌。经重复测定仍为相同结果。所有水样经传统分离培养法和普通PCR法检测均显示为阴性。对不同稀释度模拟痰样检测，菌量为102CFU/ml及以上浓度的模拟痰样均可检出。对临床80份随机痰液标本进行检测，2份23SrRNA基因检测及mip基因检测均阳性，而其余标本均阴性。　　结论：本文建立的TaqMan探针荧光定量PCR是一种可同时区分嗜肺与非嗜肺军团菌属的特异、敏感的方法，可用于环境标本及临床痰样的检测。