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目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)H19、S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)在苯并[a]芘(BaP)所致BEAS-2B细胞8-羟基鸟嘌吟DNA糖苷酶1(OGG1)甲基化、DNA氧化损伤及细胞周期阻滞的影响。方法:通过 siRNA 技术构建六种低表达(si-H19,si-SAHH,si-DNMT1,si-H19+si-SAHH,si-H19+si-DNMT1,si-SAHH+si-DNMT1)细胞模型,均设有阴性序列对照组。通过采用Western blot检测DNMTs蛋白表达水平,通过采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测DNMT1活性及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量,通过采用免疫共沉淀(Co-IP)检测SAHH和DNMT1的相互作用,通过免疫荧光(IF)观察H19、SAHH及DNMT1的分布,通过采用焦磷酸测序法检测OGG1基因甲基化水平,通过采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布。结果:染毒后,BEAS-2B细胞中DNMT1的表达量升高(P<0.05),在32μmol/L BaP染毒24h时较溶剂对照升高了 58%,DNMT3B的表达量降低(P<0.05),在32μmol/LBaP染毒24h时较溶剂对照降低了 39.4%,而DNMT3A表达量变化在 32μmol/LBaP 染毒 24h 时不显著(P>0.05)。染毒后各型低表达(si-H19,si-SAHH,si-H19+si-SAHH)细胞DNMT1表达和活性水平,与WT染毒细胞相比,明显降低(P<0.05)。转染与染毒有交互效应(P<0.05)。调整染毒因素为协变量,si-H19+si-SAHH细胞DNMT1表达和活性水平的修正均数(表达0.68,活性0.62)较WT细胞的修正均数(表达1.18,活性1.18)明显降低(P<0.05)。Co-IP结果发现,染毒后WT细胞和si-NC细胞DNMT1结合SAHH蛋白含量与WT未染毒细胞相比,显著升高了 42.6%和40.5%(P<0.05)。在si-H19细胞染毒后,与正常未染毒细胞相比,DNMT1结合SAHH蛋白含量显著升高了56%(P<0.05)。转染与染毒有交互效应(P<0.05)。调整染毒因素为协变量,si-H19细胞DNMT1结合SAHH蛋白含量的修正均数(1.38)较WT细胞的修正均数(1.21)明显升高(P<0.05)。IF结果发现,BaP染毒后,BEAS-2B细胞中H19、SAHH和DNMT1主要在核周质以及细胞核中存在共定位。染毒后细胞内DNMT1蛋白表达的荧光与WT细胞相比加强,H19和DNMT1以及SAHH和DNMT1在核周质以及细胞核中共定位的荧光强度增强。在si-H19细胞染毒后,与si-H19细胞未染毒相比,SAHH和DNMT1在核周质以及细胞核中共定位的荧光强度增强。焦磷酸测序结果发现,染毒后各型(WT、si-NC、si-DNMT1、si-H19+si-DNMT1和si-SAHH+si-DNMT1)细胞OGG1甲基化水平,与WT未染毒细胞相比,均显著升高(P<0.05),其中si-DNMT1和si-SAHH+si-DNMT1细胞染毒前后OGG1甲基化水平,与WT未染毒细胞相比,均明显升高(P<0.05)。与WT染毒细胞相比,si-SAHH+si-DNMT1细胞染毒后OGG1甲基化水平升高了 21.1%(P<0.05)。转染与染毒有交互效应(P<0.05)。调整染毒因素为协变量,与WT细胞OGG1甲基化水平的修正均数(1.14)相比,si-DNMT1细胞(1.28)和si-SAHH+si-DNMT1细胞(1.37)明显升高(P<0.05)。ELISA结果发现,染毒后各型(WT、si-NC,si-DNMT1、si-H19+si-DNMT1和si-SAHH+si-DNMT1)细胞8-OHdG含量,与WT未染毒细胞相比,均显著升高(P<0.05),且与WT细胞染毒后相比,si-SAHH+si-DNMT1细胞染毒后8-OHdG含量升高了 19.2%(P<0.05),si-H19+si-DNMT1细胞则未见明显差异(P>0.05)。转染与染毒有交互效应(P<0.05)。调整染毒因素为协变量,与WT细胞8-OHdG含量的修正均数(1.15)相比,si-DNMT1细胞(1.20)和si-SAHH+si-DNMT1细胞(1.24)明显升高(P<0.05)。FCM 结果发现,染毒后各型[WT、si-NC、si-DNMT1 si-H19+si-DNMT1和si-SAHH+si-DNMT1)细胞S期细胞比率,与WT未染毒细胞相比,均分别升高了 33.6%、34.0%、34.6%、38.0%和 60.2%(P<0.05),其中无论是否染毒,si-H19+si-DNMT1和si-SAHH+si-DNMT1细胞S期细胞比率,与WT未染毒细胞相比,均明显升高(P<0.05);与WT细胞染毒后相比,染毒后si-SAHH+si-DNMT1细胞明显升高了 22.6%(P<0.05),而si-H19+si-DNMT1细胞则未见明显差异(P>0.05)。转染与染毒有交互效应(P<0.05)。调整染毒因素为协变量,与WT细胞S期细胞比率的修正均数(1.24)相比,si-SAHH+si-DNMT1细胞(1.37)明显升高(P<0.05)。结论:1、BaP染毒后H19与SAHH的结合调控DNMT1,使其表达和活性升高。2、BaP染毒促进SAHH和DNMT1结合,干扰H19进一步增强两者的相互作用。3、H19/SAHH/DNMT1参与调控OGG1甲基化、DNA氧化损伤和细胞周期。