由产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)引起的仔猪、犊牛和羔羊腹泻是幼畜的一种最常见病,在世界范围造成严重的经济损失。ETEC菌株的致病前提是通过细菌表面的黏附素与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结合,从而在该局部组织定居、繁殖、产生毒素或侵入深部损伤或破坏组织,引起疾病或造成隐性感染。而F5+ETEC是引起仔猪腹泻病的重要病原菌之一,因而对F5菌毛进行深入研究具有重要的理论及现实意义。本研究根据已发表的F5菌毛基因序列设计引物,用PCR扩增法从F5+参考菌株中扩增出496bp的基因序列,通过测序和序列分析比较,所获核苷酸序列与己发表的F5菌毛基因序列同源性达到99.8%。将不含信号肽的F5基因片段按正确的阅读框架克隆入pET-30a(+)表达载体中,用IPTG诱导实现其在大肠杆菌中的表达。SDS-PAGE电泳和Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白约为23ku。将原核表达产物经Ni-NTA柱提纯后免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,采用间接ELISA筛选出一株稳定分泌针对F5基因的杂交瘤细胞,Western blot结果表明该杂交瘤细胞培养上清与融合表达的F5蛋白具有良好的反应性。特异性鉴定显示本研究制备的单克隆抗体与受试大肠杆菌(F4+、F6+)无交叉反应。