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茉莉酸广泛存在于高等植物中,在植物响应病原侵染的信号通路中起着十分重要的作用。它可以诱导植物抗性基因表达,产生JRP蛋白(jasmonate-regulatedproteins)抵制病虫害。在大麦中发现了一类32kDa大小JRP蛋白(JRP-32),但这类蛋白的功能并不清楚。
本研究从小麦中克隆得到了一个cDNA序列(命名为Ta-JA1基因),该基因cDNA全长1158bp,开放阅读框长912bp,编码一个山304个氨基酸组成的蛋白,分子量32.7kDa,序列比对表明这是一个JRP-32蛋白。Ta-JA1基因在小麦中以单拷贝的形式存在,仅在茎组织中表达,在叶片和根中几乎检测不到表达。Ta-JA1有两个结构域:N末端的防御反应结构域(dirigent)和C末端的木菠萝素相关结构域(jacalin)。为了研究每个结构域具有的功能以及它们融合成一个基因后会具有什么样的优势。通过设计PCR引物,将Ta-JA1基因拆分成两个完整基因(dirigent和jacalin),并分别构建了dirigent,jacalin和Ta-JA1基因的pKYLX71表达载体,通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草,成功获得了转基因植株。用IPTG诱导三个基因的原核表达载体,并对表达的总蛋白进行了凝集活性的测定,结果显示Jacalin和Ta-JA1蛋白都能凝集新鲜的兔血,而Dirigent蛋白不具有凝集功能。凝集细菌实验表明Jacalin和Ta-JA1不能凝集大肠杆菌DH5a,但对野火病菌有作用,这也说明了jacalin和刀a-JA1基因可能具有抗病功能。对T1代转基因种子和转基因叶片进行了抗性实验,包括盐、干旱(非生物胁迫)和接种烟草野火病菌(生物胁迫)处理,结果显示转dirigent的植株对盐和干旱的敏感性增加,jacalin在低盐浓度下能提高植物的耐盐性,然而却降低了耐旱性。Ta-JA1基因的表现介于两者之间。抗病性分析显示三个基因都能提高烟草抗野火病的能力。