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本文研究了磷缺乏及其与细胞分裂素6-BA组合对三裂叶野葛毛状根生长及其次生代谢物异黄酮类化合物产生的影响,以及毛状根培养过程中可溶性糖含量、可溶性蛋白和MDA含量及SOD、POD和PAL酶活性等的变化。所得结果如下:
三裂叶野葛毛状根在完全缺磷的培养基中几乎不能生长。培养基无机磷缺乏会抑制三裂叶野葛毛状根的生长,且无机磷浓度越低其抑制作用越明显,毛状根变得越纤细、根尖越容易褐化。磷缺乏能够提高毛状根的PAL酶活性,且随着培养时间的延长其酶活性越来越高;同时磷缺乏培养的三裂叶野葛毛状根每克干物质的总异黄酮类化合物含量在培养前期低于对照;但随着培养时间的延长,其总异黄酮类化合物的含量则逐渐高于对照(全磷培养的毛状根)。而磷缺乏培养时,三裂叶野葛毛状根的可溶性蛋白含量、MDA含量以及其SOD活性明显升高,但其POD活性则有所下降,并且随着培养基无机磷浓度的升高,保护酶POD活性也逐步降低。
与对照组(不加细胞分裂素6-BA的磷缺乏培养基培养的毛状根)相比,磷缺乏和0.5 mg/L或3.0 mg/L6-BA组合都抑制三裂叶野葛毛状根生长,促使毛状根侧根发生处膨大呈瘤状,且无机磷浓度愈高,这种抑制效应也愈明显,其中以相同无机磷浓度加3.0 mg/L 6-BA的抑制效果较低浓度0.5 mg/L 6-BA更明显。毛状根切片的显微观察可见,与对照相比,缺磷加6-BA组合处理可使毛状根维管束变粗,根横切面细胞明显增多,但细胞体积没有明显增加。同时,磷缺乏加细胞分裂素6-BA结合培养虽然抑制毛状根的生长,但却可提高三裂叶野葛毛状根培养物异黄酮类化合物的积累,而且高浓度3.0 mg/L 6-BA对提高异黄酮含量的效果更明显,而低浓度0.5 mg/L 6-BA则能够明显提高毛状根的PAL酶活性。此外,6-BA可使磷缺乏培养的三裂叶野葛毛状根的POD和SOD活性明显升高,但却使其MDA含量和可溶性糖含量降低。