【摘 要】
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RNA干扰已经成为基因功能研究的强大工具。在本论文中，我们发现poly(A)在MCF-7细胞中能够非特异的增强siRNA对外源基因的沉默效应。我们以外源报告基因绿色荧光蛋白(enhanced
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RNA干扰已经成为基因功能研究的强大工具。在本论文中，我们发现poly(A)在MCF-7细胞中能够非特异的增强siRNA对外源基因的沉默效应。我们以外源报告基因绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein，EGFP)和红色荧光蛋白(red fluorescence protein，RFP)为靶标，放弃了通常在siRNA3′端添加UU的设计思路，依靠体外转录的方法在siRNA反义链的3′端加上了单链的poly(A)尾巴，制备了siRNA-poly(A)分子，并探索了siRNA-poly(A)与外源基因沉默间的关系，同时对其发生机制进行了初步研究。研究结果显示，siRNA-poly(A)相对于原型siRNA而言具有更强的沉默外源基因的能力，这种增强作用与poly(A)序列和长度密切相关，是一种不依赖于siRNA序列的非特异作用。研究表明，大于50nt的单链poly(A)能够非特异抑制外源基因的表达，提示poly(A)是非特异增强沉默作用的诱发因素。进一步研究揭示，siRNA-poly(A)在体内、体外皆能够激活双链RNA依赖的蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase，PKR)和降低外源基因mRNA的稳定性，提示了这可能是siRNA-poly(A)非特异增强沉默外源基因的作用机制。本研究提示siRNA-poly(A)包括带有poly(A)的小RNA分子可能参与细胞抵御外源基因的侵入，具有潜在的生物学意义。
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