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本文主要从以下几方面进行了论述: 第一部分 玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞线粒体膜电位和分布的影响 目的：研究玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞线粒体膜电位及分布的影响，以期探讨冷冻复苏过程对卵母细胞损伤的机制。 方法：以小鼠新鲜成熟卵母细胞为实验研究对象，分为对照组（新鲜的成熟卵母细胞）和冷冻组（玻璃化冷冻复苏后的卵母细胞）。以乙二醇（EG）和二甲基亚砜（DMSO）作为冷冻保护剂，分别通过荧光探针JC-1和Mito Tracker Green来研究玻璃化冷冻过程对卵母细胞线粒体膜电位和分布的影响。 结果：玻璃化冷冻后，小鼠卵母细胞线粒体红色荧光强度与绿色荧光强度比值明显低于对照组（1.28 versus1.70，P<0.05）。对照组中，小鼠卵母细胞呈极性分布的比例明显高于冷冻组（63％versus31％，P<0.05）。 结论：玻璃化冷冻过程对卵母细胞线粒体膜电位和分布有着明显的影响，进而可能导致卵母细胞的受精率及后续发育潜能的下降。 第二部分 玻璃化冷冻对体外成熟卵母细胞纺锤体及线粒体功能的影响 目的：在辅助生殖技术中，对未成熟卵母细胞行体外成熟后冻存是一种增加患者可用卵子和保存肿瘤患者生育力的新方法。但是，卵母细胞的冷冻技术仍然不成熟。因此，研究玻璃化冷冻对人体外成熟卵母细胞纺锤体结构及线粒体功能的影响对进一步认识及提供冷冻技术有着重要意义。 方法：未成熟卵母细胞来自于行卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）患者的捐赠。通过体外成熟技术将未成熟的卵母细胞培养成熟，然后分为冷冻组（vIVM）和对照组（fIVM）。以乙二醇（EG）及二甲基亚砜（DMSO）作为冷冻保护剂，分布通过α-tubulin和荧光探针JC-1来研究玻璃化冷冻过程对卵母细胞纺锤体和线粒体功能的影响。 结果：在fIVM组和vIVM组之间，未成熟卵母细胞成熟率没有统计学差异(76.3％versus74.4％，P>0.05)。与fIVM组相比，vIVM组中卵母细胞的线粒体膜电位明显下降(1.397vs.1.019,P<0.05)。fIVM组和vIVM组中卵母细胞的纺锤体及染色体的结构均没有明显差别。 结论：体外成熟过程对卵母细胞的纺锤体和染色体的组装有明显的影响，但玻璃化的冷冻及复苏过程并不影响纺锤体和染色体的结构。然而，卵母细胞线粒体的膜电位却在玻璃化冷冻复苏后明显下降。玻璃化冷冻过程对卵母细胞线粒体功能的影响可能就是其以后发育潜能下降的主要因素。