白虎汤中纳米相态的分离与表征及其解热作用研究

来源 :黑龙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lbsylh
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中药汤剂是一个复杂的分散体系,其有效成分以溶质或分散相在分散介质中形成真溶液、胶体、混悬液和乳浊液等不同分散相态。然而,有效成分,尤其是难溶性成分究竟以何种相态实现分散、吸收、转运和起效的,鲜有报道。本文以白虎汤为切入点,对白虎汤进行了相态拆分,着重对纳米粒子所存在的纳米相态进行了表征,比较了解热有效成分新芒果苷和芒果苷在不同分散相态的含量差异,并通过解热实验揭示了白虎汤解热作用的有效相态为纳米相态(纳米粒子),该纳米粒子具有脑和肺的靶向作用。因此,本研究为传承中药经典剂型提供了科学、新颖的理论依据。目的:本研究从分离和表征白虎汤纳米相态为出发点,并对白虎汤纳米相态与解热效果之间的关系进行探索,旨在阐明白虎汤中相态的分布,揭示白虎汤解热作用的科学本质。方法:(1)利用透析与超速离心相结合的方法对白虎汤进行相态拆分;通过TEM来观察白虎汤拆分后所获得的纳米相态的形态和所含元素进行检测;运用马尔文粒径仪对纳米相态的粒径大小和分布进行测定;(2)采用HPLC法分析白虎汤中不同相态的主要成分(新芒果苷、芒果苷、甘草苷和甘草酸铵)的含量,采用EDTA-2Na滴定法测定了白虎汤及白虎汤纳米相态的钙离子含量;(3)通过LPS诱导家兔发热模型来观察真溶液相态、纳米相态及沉淀相态等各给药组的解热作用,并通过酶联免疫吸附法对家兔血清中IL-1β、IL-6和TNF-α炎性因子的含量进行检测,探讨不同相态与解热功效的关联性及作用机制;(4)利用活体成像的方法对白虎汤纳米相态的靶向性进行研究。结果:(1)透析与超速离心相结合的方法可对白虎汤进行相态拆分,得到真溶液、纳米及沉淀等三种不同相态,其中,在纳米相态中发现大量粒径在100 nm左右的球形纳米粒子,此外,还存在2.3%的5 μm-7 μm粒子,Zeta电位为-3.11,该粒子中含有C、O、Si、Na、Ca、Mn、Fe、Cu、Na等元素。(2)对白虎汤中不同相态的HPLC测定结果表明,84%以上的新芒果苷、芒果苷、甘草苷和甘草酸铵集中于纳米相态;纳米相态中钙离子的含量占白虎汤的86.9%,白虎汤及纳米相态中钙离子含量均高于石膏组,可见白虎汤复方可促进钙离子溶出。(3)通过建立家兔发热模型,结果表明,白虎汤纳米相态与其他相态相比较,白虎汤纳米相态在解热疗效上突显优势,特别是在降低血清中的炎性因子IL-1β、IL-6以及TNF-α的含量上较为明显,可显著减少发热家兔的炎症反应。总之,白虎汤纳米相态在解热环节中产生了关键性的调控作用。(4)采用FITC标记的纳米粒子组与FITC、芒果苷、FITC+芒果苷组相比,在小鼠肺和脑的部位可观察到较强的荧光信号,明显强于其他脏器,2 h在肺和脑部位的蓄积量达到最大,故白虎汤纳米相态具有肺和脑的靶向性。结论:白虎汤中首次发现纳米相态,该相态主要由100 nm左右的球形粒子组成,芒果苷和新芒果苷这些难溶性成分主要分布在纳米相态中。这些纳米相态具有肺和脑的靶向性,且解热作用较其他相态强,是白虎汤的主要解热相态。上述研究成果揭示了白虎汤中解热有效成分在溶液中的存在形式以及体内的起效过程,为深入研究汤剂这一经典剂型的分散体系提供科学、全新的参考资料。
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