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卵母细胞在体内的发育是个极其复杂的过程。到目前为止,对于绵羊卵母细胞成熟调节的机制尚未完全清楚,从而制约了绵羊卵母细胞体外成熟培养质量的进一步提高。本研究通过对绵羊有腔卵泡中的卵母细胞及其在体外成熟过程中细胞核核相及皮质颗粒的分布特征进行研究,探索了绵羊卵母细胞细胞核成熟、细胞质成熟的变化规律。 用地衣红染色方法观察绵羊早期有腔卵泡(1 mm≤直径≤2.5 mm)与中期有腔卵泡(2.5 mm<直径≤7.5 mm)中卵母细胞的核相特征,用FITC-PNA、Hoechst33342双染方法观察两组绵羊卵泡中处于不同核相时期的卵母细胞的皮质颗粒分布特征,结果表明:成年绵羊早期和中期有腔卵泡中的绝大部分卵母细胞处于GⅤ期的不同阶段,中期有腔卵泡中卵母细胞的核成熟进程比早期有腔卵泡中卵母细胞的核成熟进程靠后;早期有腔卵泡与中期有腔卵泡中卵母细胞的皮质颗粒分布类型相同,且各类型所占比例无显著性差异(P>0.05)。 用FITC-PNA、Hoechst33342双染方法研究不同直径绵羊卵泡内卵母细胞以及体外成熟过程中绵羊卵母细胞的核相及皮质颗粒分布特点,结果表明:随着绵羊卵母细胞核成熟进程的发展,其皮质颗粒的分布与迁移也发生了规律性的变化,按照其发生特点及概率可划分为五种类型,即均匀分布、空洞式分布、周边式分布、双层分布、环状分布(其中羔羊卵母细胞并未发现明显的双层分布方式);皮质颗粒的迁移方式为由卵母细胞胞质中央的皮质颗粒先向卵母细胞近皮质处迁移,近皮质处的皮质颗粒再逐渐向细胞膜下迁移形成双层分布,最后近皮质处的皮质颗粒迁移完毕,在细胞膜下形成一个环状结构。 测定成年绵羊和羔羊卵母细胞体外成熟0h、8h、12h、16h、24 h的核相及皮质颗粒分布情况,结果显示:(1)无论是成年绵羊还是羔羊,其卵母细胞在体外成熟的5个时间点所对应的特征性核相分别是GⅤ期、GⅤBD期、MⅠ期、AⅠ~TⅠ期、MⅡ期核相,其百分比均超过50%以上,其中成年绵羊卵母细胞在ⅣM24 h的MⅡ期比例为73.2%,羔羊为59.4%,两者差异显著(P<0.05);(2)随着卵母细胞体外成熟时间的延长,成年绵羊卵母细胞的前三种皮质颗粒分布比例逐渐下降,而后两种皮质颗粒的分布比例逐渐上升。羔羊卵母细胞的前两种皮质颗粒的分布比例逐渐下降,而后两种皮质颗粒的分布比例逐渐上升,但羔羊卵母细胞在ⅣM12 h、16 h、24 h时,皮质颗粒的均匀分布比例之间差异不显著(P>0.05)。另外,成年绵羊卵母细胞在ⅣM24 h时,皮质颗粒呈环状分布的比例达到了47%,而羔羊卵母细胞只达到了25.7%,两者之间差异显著(P<0.05);(3)随着卵母细胞减数分裂成熟进程的发展,成年绵羊卵母细胞的前三种皮质颗粒分布比例逐渐下降,而后两种皮质颗粒的分布比例逐渐上升。羔羊卵母细胞的前两种皮质颗粒的分布比例逐渐下降,而后两种皮质颗粒的分布比例逐渐上升,但羔羊卵母细胞中皮质颗粒呈均匀分布的比例在各减数分裂阶段均较高,即由GⅤ期~MⅠ期,羔羊卵母细胞中皮质颗粒呈均匀分布的比例均显著高于同时期其他皮质颗粒分布类型比例(P<0.05)。另外,无论是成年绵羊还是羔羊,皮质颗粒呈环状分布的卵母细胞比例均在MⅡ期时达到最高,其比例分别为56.8%和44%,显著高于同时期其它类型比例(P<0.05),且显著高于其它时期皮质颗粒呈环状分布的卵母细胞比例(P<0.05),两比例之间差异显著(P<0.05)。可见,在体外成熟过程中,大部分绵羊卵母细胞随着细胞核的成熟,其皮质颗粒的迁移程度逐渐增大,有些卵母细胞的皮质颗粒迁移速度相对滞后或在不同的减数分裂阶段中发生停滞。相比较羔羊卵母细胞,成年绵羊卵母细胞更有能力完成细胞核的成熟以及皮质颗粒的迁移。