研究目的观察恩替诺特对骨肉瘤MG63细胞形态、增殖、集落形成、迁移、侵袭和凋亡的影响,并进一步探讨恩替诺特是否通过Wnt/β-catenin信号通路发挥抗骨肉瘤作用。研究方法骨肉瘤是一种严重威胁儿童和青少年健康的恶性肿瘤,其恶性程度高且容易早期转移,预后很差。恩替诺特是一种很有前途的I类组蛋白去乙酰化酶抑制剂,对众多恶性肿瘤有很好疗效。但是恩替诺特治疗骨肉瘤的研究极少,为了研究恩替诺特对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制,本研究进行了以下实验。购买骨肉瘤细胞系MG63细胞进行体外培养,取对数期细胞用于实验研究。根据实验需要将实验分为对照组和不同恩替诺特浓度的实验组。对照组只给予0.1%DMSO干预24～72h,实验组给予不同浓度恩替诺特干预24～72h,然后行细胞增殖实验（CCK-8法）,观察不同浓度恩替诺特和不同干预时间对MG63细胞增殖的影响,并根据细胞增殖实验（CCK-8法）结果选择合适的恩替诺特浓度和合适的干预时间用于后续实验（后续实验包括细胞形态观察、集落形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、流式细胞仪分析细胞凋亡、QRT-PCR和蛋白质印迹法）。下一步分别进行细胞形态观察、集落形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和流式细胞仪分析细胞凋亡实验。最后提取mRNA和蛋白进行QRT-PCR实验和蛋白质印迹法实验,观察β-catenin、E-cadherin和Caspase9的mRNA和蛋白的表达情况。研究结果1、细胞增殖实验（CCK-8法）结果表明:恩替诺特对MG63细胞有明显的增殖抑制作用,且在一定范围内与恩替诺特浓度和干预时间呈正相关。2、细胞形态观察表明:恩替诺特可以使MG63细胞胞质皱缩,胞质变细长,同时还使细胞贴壁能力下降。3、集落形成实验结果表明恩替诺特可以显著降低MG63细胞的体外增殖能力和集落形成能力。4、细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验表明恩替诺特还会显著降低MG63细胞迁移能力及侵袭能力。5、流式细胞仪分析细胞凋亡实验结果表明,恩替诺特可以显著促进MG63细胞凋亡。6、恩替诺特可以促进MG63细胞凋亡基因（Caspase9）和肿瘤转移有关基因（E-cadherin）的mRNA和蛋白表达;此外,恩替诺特还可以抑制β-catenin基因的mRNA和蛋白表达,β-catenin基因mRNA和蛋白表达降低会抑制Wnt/β-catenin信号通路而发挥抗骨肉瘤作用。研究结论1、恩替诺特可以显著降低骨肉瘤MG63细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力并促进骨肉瘤MG63细胞凋亡。2、恩替诺特通过抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达来抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而发挥抗骨肉瘤作用。3、恩替诺特作为一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,是治疗骨肉瘤的潜在有效靶向药物,对骨肉瘤的临床治疗具有重大意义。