【摘 要】
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本文以黄颡鱼(P. fulvidraco)为实验材料,采用组织块培养的方法,研究黄颡鱼吻端、尾鳍、肾脏、心脏组织在体外培养环境下生长状况并对黄颡鱼继代吻端细胞染色体核型进行了分
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本文以黄颡鱼(P. fulvidraco)为实验材料,采用组织块培养的方法,研究黄颡鱼吻端、尾鳍、肾脏、心脏组织在体外培养环境下生长状况并对黄颡鱼继代吻端细胞染色体核型进行了分析。黄颡鱼吻端、尾鳍、肾脏、心脏组织在M199(10 %FBS)培养基,27℃条件下进行原代培养,结果表明,黄颡鱼吻端组织3~5 h迁出细胞,迁出时间早于其他组织。经胰酶消化法处理,吻端组织可继代培养至第8代,尾鳍组织培养至第4代。吻端和尾鳍细胞为纤维型,肾脏细胞为上皮型,心脏细胞为成纤维型。在不同温度(15、27、37℃)、血清浓度(0、10 %、20 %)和培养基(M199、M1640、MEM)下培养吻端细胞,通过绘制细胞生长曲线,发现27℃及含有10 % FBS的M199培养基最适于吻端细胞生长增殖。采用H33342和H.E.染色方法观察吻端和尾鳍细胞形态,正常细胞核H33342染色浅淡,核内结构清楚,核膜光滑,染色质分布均匀;凋亡细胞的H33342染色明显增强,胞核缩小,核膜皱缩,染色质凝聚、边缘化,晚期染色质碎裂。H.E.染色清楚显示处于对数生长期的吻端和尾鳍细胞大量分裂增殖的现象。采用常规染色体制片方法,分别对继代培养吻端细胞和鱼体吻端组织进行染色体玻片制备。统计结果表明,离体培养细胞染色体数与鱼体细胞染色体数相同,基本染色体数占统计细胞的71.55 % ,染色体数2n=52 ,核型公式为2n=26m+20sm+6t,臂数NF=90。与活体组织染色体比较,未见异常,为正常的二倍体细胞。
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