论文部分内容阅读
犬细小病毒病是危害我国养犬业最为严重的传染病之一,注射犬细小病毒单克隆抗体（Canine Parvovirus Monoclonal Antibody,CPV McAb）是治疗犬细小病毒病最有效的手段之一。用含血清的培养基培养细胞生产单克隆抗体弊端诸多,而用无血清培养基悬浮培养细胞,其培养工艺易于放大、且稳定性髙。为实现利用无血清培养基安全高效的培养细胞生产CPV McAb,本研究以稳定表达CPV McAb的贴壁培养的CPV ID3细胞株进行悬浮驯化和无血清培养基筛选优化,为CPV McAb的高效工业化生产提供基础数据支持。首先用商业无血清培养基通过连续传代培养方法将用含血清培养基培养的CPV ID3细胞驯化成能用无血清培养基培养的悬浮细胞,建立CPV ID3细胞株的无血清悬浮细胞主库。通过比较批次培养和恒速流加谷氨酰胺两种培养方式培养CPV ID3细胞的生长数据,确定用恒速流加谷氨酰胺作为无血清培养基筛选优化试验中的培养方式。在此基础上,利用Design Expert软件中的Simplex Centroid Design方法和Central Composite Design方法进行无血清培养基筛选优化试验,并使用最佳培养基配方SBMY培养基连续传代培养细胞以及与其他商业培养基进行对比来验证最优培养基,经验证筛选出的SBMY无血清培养基能维持CPV ID3细胞株稳定连续传代,最大活细胞密度达8.87×106cells/m L。以提高抗体效价为目的,将SBMY培养基作为基础培养基,进行补料培养基及其流加策略的筛选试验,经比较筛选出最佳补料培养基组合及其相对应的最佳流加策略,即从接种细胞后的第2天开始,每天流加占初始培养体积1.50%的Max FA、0.15%的Max FB、1.00%的小麦水解物及1.25%的200 m M谷氨酰胺。最后经摇瓶和3 L生物反应器验证筛选优化出的无血清培养基组合及其流加策略,最大活细胞密度可达14.70×106cells/m L,反应器体系与摇瓶体系中获得的抗体效价均可达到1:3840,且超过用原含血清的培养基灌流培养所获得的最高抗体效价1:640。综上所述,筛选优化出适合CPV ID3细胞株高效生产CPV McAb的无血清培养基组合。