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目的：通过构建miR-106b过表达和抑制慢病毒表达载体，分别使子宫内膜癌HEC-1B细胞中miR-106b的表达水平上调和下调，进而研究其对HEC-1B细胞周期和细胞凋亡的作用。通过miRNAs靶基因预测数据库分析，筛选出miR-106b的靶基因。用荧光定量PCR和细胞免疫荧光法检测实验各组预测靶基因的表达变化，为进一步研究miR-106b在子宫内膜癌中的作用及机制打下基础。 方法： 1)慢病毒质粒构建：hsa-miR-106b过表达和抑制慢病毒质粒由上海生博生物医药科技公司构建、包装和纯化。 2)流式细胞技术：慢病毒转染细胞72h后，收集细胞，染色后流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。 3)荧光定量PCR：设计并合成miR-106b逆转录引物和其上下游引物，提取细胞总RNA逆转录合成cDNA，荧光定量PCR检测转染前后HEC-1B中miR-106b表达变化水平。设计并合成肿瘤易感基因101(Tumor susceptibility gene 101，TSG101)上下游引物，提取细胞总RNA逆转录合成cDNA，荧光定量PCR检测转染前后HEC-1B中TSG101 mRNA表达水平。 4)生物信息学分析：通过Pic Tar、Target Scan和miRGen Targets三个数据库分析，取其交集，预测miR-106b的潜在靶基因。 5)细胞免疫荧光法：慢病毒转染HEC-1B细胞后经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆，用鼠抗人TSG101单克隆一抗孵育过夜，再与结合有藻红蛋白(phycoerythrin，PE)的抗鼠荧光二抗室温温育，使用正置荧光显微镜观察HEC-1B细胞内TSG101蛋白水平。 结果： 1)慢病毒转染HEC-1B细胞经嘌呤霉素筛选后，GFP在HEC-1B细胞中的表达达到80％左右。说明miR-106b过表达和抑制重组慢病毒载体构建成功。 2)miR-106b表达水平：荧光定量PCR结果显示，在HEC-1B细胞中存在miR-106b的表达。与未转染慢病毒的空白组相比，过表达组miR-106b表达水平升高了1倍，抑制组miR-106b表达水平降低了0.5倍，且差异均具有统计学意义(P<0.05)；而过表达对照组和抑制对照组miR-106b表达水平与空白组相比无明显差异。慢病毒载体起到了上调和下调HEC-1B细胞内miR-106b的作用。 3)细胞周期结果：与空白组相比，抑制组G1期细胞比例升高，S期降低，细胞周期阻滞在G1期；过表达组S期细胞比例明显升高，且差异均具有统计学意义(P<0.05)，而过表达对照组、抑制对照组与空白组相比变化无明显差异。 4)细胞凋亡结果：与空白组相比，抑制组细胞凋亡数增加，过表达组细胞凋亡数无明显变化。而过表达对照组、抑制对照组与空白组相比无明显差异，提示miR-106b和HEC-1B细胞的凋亡相关。 5)生物信息学分析结果：miR-106b的潜在靶基因为TSG101。 6)TSG101 mRNA表达水平：与空白组相比，抑制组、抑制对照组、过表达和过表达对照组TSG101的mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。我们推测miR-106b并非通过转录过程来调节TSG101的mRNA表达。 7)TSG101蛋白表达水平：间接免疫荧光证实TSG101蛋白主要定位于子宫内膜癌HEC-1B细胞的胞核中；与空白组相比，抑制组TSG101蛋白表达水平上调，过表达组下调，而过表达对照组、抑制对照组与空白组相比无明显差异，说明miR-106b可能是直接调控TSG101的翻译过程来调节其蛋白水平。 结论： 1)与空白组相比，miR-106b抑制组细胞周期阻滞在G1期，过表达组G1期细胞数下降，S期细胞比例明显升高，说明miR-106b可以促进HEC-1B细胞周期进展。 2)结合生物信息学数据库分析，预测TSG1Ol可能是miR-106b调控的靶基因。过表达miR-106b下调TSG101蛋白表达水平，抑制miR-106b上调TSG101蛋白表达水平，而过表达组和抑制组TSG101 mRNA表达水平没有差异，表明miR-106b在翻译水平上负性调控TSG101。研究结果表明miR-106b可能是通过影响TSG101表达，发挥对细胞周期的调控作用。