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目的通过观察加味生肌玉红膏对湿热型肛瘘术后创面炎性因子TNF-α及AQP3水通道蛋白表达的影响,探讨湿热型肛瘘术后创面愈合过程中炎症信号通路与水通道蛋白的关系,论证中医“煨脓长肉”法治疗肛瘘术后创面的分子机制,为加味生肌玉红膏在临床的应用提供科学理论依据。方法将70只SPF级大鼠分为空白组,模型组(凡士林组),对照组(康复新组),实验组(加味生肌玉红膏组),PDTC+模型组(PDTC+凡士林组),PDTC+对照组(PDTC+康复新对照组)和PDTC+实验组(PDTC+加味生肌玉红膏组)。除空白组外其余各组大鼠进行湿热造模及肛瘘术后感染创面造模。PDTC+模型组、PDTC+对照组与PDTC+实验组在上述条件下,每只大鼠腹腔注射NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵,连续5日。造模成功后进行药物干预,肉眼观察并记录各组大鼠生活习性、创面变化、愈合时间及愈合率等,于干预后3、7、14天取创面新生肉芽组织固定保存,采用HE染色法观察创面形态结构及病理学改变,ELISA检测创面肉芽组织TNF-α表达量,免疫组化检测创面组织中AQP3组织分布及表达水平,Western blotting检测各组大鼠创面组织中AQP3总蛋白的含量。结果1.大鼠一般情况:造模成功后,除空白对照组外各组大鼠均出现精神萎靡,饮食、活动量减少,毛发无光泽等湿热证表现。药物干预后实验组、PDTC+实验组、对照组、PDTC+对照组大鼠一般情况及镜下肉芽组织形态结构优于模型组、PDTC+模型组。对照组、PDTC+对照组大鼠镜下肉芽组织形态结构变化相似,实验组、PDTC+实验组一般情况、创面生长及肉芽组织镜下形态结构优于对照组、PDTC+对照组。2.创面愈合时间与创面愈合率:干预初期各组创面愈合率无显著差异(P>0.05)。在干预中期PDTC+模型组创面愈合率高于模型组(P<0.01);干预后期两组创面愈合率无显著差异(P>0.05)。模型组与PDTC+模型组创面愈合时间较长,出现创面延迟愈合的情况。与模型组、PDTC+模型组比较,实验组、对照组、PDTC+实验组、PDTC+对照组创面愈合时间更短,干预中后期创面愈合率也更高(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01);其中以PDTC+实验组创面愈合速度最快,干预中后期创面愈合率最高(P<0.01)。实验组创面愈合速度和干预中后期创面愈合率仅次于PDTC+实验组(P<0.01)。与对照组、PDTC+对照组相比,实验组干预中后期创面愈合率更高(P<0.01,P<0.01),创面愈合时间也更早(P<0.01,P<0.05)。对照组与PDTC+对照组创面愈合时间无显著差异(P>0.05),PDTC+对照组在药物干预中期创面愈合率高于对照组(P<0.01),干预后期两组间创面愈合率无显著差异(P>0.05)。3.ELISA检测结果显示:模型组、PDTC+模型组各阶段TNF-α表达均较高,干预初期模型组TNF-α表达高于PDTC+模型组(P<0.01),干预中后期两组间TNF-α表达无显著差异(P>0.05);药物干预初期和中期,PDTC+对照组TNF-α表达低于对照组(P<0.01),但在后期两组间TNF-α表达量无显著差异(P>0.05)。与模型组、PDTC+模型组、对照组、PDTC+对照组相比,实验组各阶段TNF-α表达均较低(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。PDTC+实验组各阶段TNF-α表达均低于实验组(P<0.01)。4.免疫组化结果显示:(1)药物干预初期,PDTC+对照组与PDTC+实验组AQP3表达水平偏低,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、实验组、对照组和PDTC+模型组AQP3表达水平偏高,四组间差异不显著(P>0.05)。与模型组、实验组、对照组及PDTC+模型组相比,PDTC+实验组AQP3表达相对偏低(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。且PDTC+对照组AQP3表达也低于模型组、实验组、对照组和PDTC+模型组(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。(2)药物干预中期,PDTC+实验组与实验组AQP3表达偏高,两组间差异不显著(P>0.05)。对照组、PDTC+对照组AQP3表达均低于PDTC+实验组、实验组(P<0.05,P<0.05);对照组与PDTC+对照组间AQP3表达无显著差异(P>0.05);PDTC+对照组与对照组AQP3表达均高于模型组(P<0.05)。PDTC+对照组AQP3表达高于PDTC+模型组(P<0.05)。对照组与PDTC+模型组间AQP3表达无显著差异(P>0.05)。模型组与PDTC+模型组AQP3表达量偏低,组间差异不显著(P>0.05)。(3)药物干预后期,各组AQP3表达均偏低,PDTC+实验组AQP3表达水平最低(P<0.01),实验组AQP3表达高于PDTC+实验组(P<0.01)。对照组、PDTC+对照组AQP3表达高于实验组(P<0.01,P<0.01);但与模型组相比,对照组、PDTC+对照组AQP3表达偏低(P<0.01,P<0.01),但对照组与PDTC+对照组间AQP3表达无显著差异(P>0.05)。PDTC+对照组AQP3表达低于PDTC+模型组(P<0.01),但对照组与PDTC+模型组间AQP3表达无显著差异(P>0.05)。模型组与PDTC+模型组AQP3表达水平偏高,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。5.Western blotting结果显示:(1)药物干预初期,PDTC+实验组与模型组、实验组及对照组相比,AQP3表达相对偏低(P<0.001,P<0.001,P<0.001)。且PDTC+对照组AQP3表达也低于模型组、实验组和对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。PDTC+对照组、PDTC+实验组与PDTC+模型组间AQP3表达无显著差异(P>0.05)。模型组、实验组、对照组和PDTC+模型组间AQP3表达也无显著差异(P>0.05)。(2)药物干预中期,模型组与PDTC+模型组AQP3表达量偏低,两组无显著差异(P>0.05)。实验组、对照组、PDTC+实验组、PDTC+对照组AQP3表达量高于模型组(P<0.0001,P<0.01,P<0.0001,P<0.0001)。与PDTC+模型组相比,实验组、PDTC+实验组、PDTC+对照组AQP3表达量偏高(P<0.0001,P<0.0001,P<0.01)。与对照组相比,实验组、PDTC+实验组AQP3表达量较高(P<0.01,P<0.001),但实验组、PDTC+实验组间AQP3表达无显著差异(P>0.05)。PDTC+实验组AQP3表达量高于PDTC+对照组(P<0.05),但PDTC+对照组与实验组之间AQP3表达差异不显著(P>0.05)。PDTC+对照组与对照组的AQP3表达量也无显著差异(P>0.05)。(3)药物干预后期,模型组与PDTC+模型组AQP3表达量较高,两组间无显著差异(P>0.05)。实验组、对照组、PDTC+实验组、PDTC+对照组AQP3表达量低于模型组(P<0.0001,P<0.05,P<0.0001,P<0.001)。与PDTC+模型组相比,实验组、PDTC+实验组、PDTC+对照组AQP3表达量偏低(P<0.01,P<0.01,P<0.05),但三组间差异不显著(P>0.05);实验组、PDTC+实验组AQP3表达量低于对照组(P<0.05,P<0.05),但实验组与PDTC+实验组间AQP3表达无显著差异(P>0.05)。对照组与PDTC+对照组AQP3表达量无显著差异(P>0.05)。结论加味生肌玉红膏、康复新均能减轻湿热型肛瘘术后创面炎症反应,促进创面愈合,但加味生肌玉红膏疗效优于康复新,尤以PDTC干预后的加味生肌玉红膏疗效最佳。我们推测加味生肌玉红膏、PDTC联合加味生肌玉红膏促进创面愈合的机制可能包括以下两方面:(1)调控NF-κB通路,降低TNF-α炎症因子表达,减轻创面炎症反应,促进创面愈合;(2)调控水通道蛋白AQP3的表达,恢复皮肤屏障功能,保持创面湿润,促进细胞增殖、分化,加速创面愈合。