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[目的]建立PC12细胞体外培养方法及氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)损伤模型,研究低温对体外培养的PC12细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤的保护作用及相关机制。[方法]采用PC12细胞株进行细胞培养,细胞传代后,取第二代,生长至第四天的PC12细胞进行实验。采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4),联合无糖DMEM(Dulbecco minimum essential medium杜尔伯科极限必需培养基)的方法建立PC12细胞的OGD/R(oxygen glucose deprivation and reperfusion)损伤模型,通过噻唑蓝(Thiazolyl Blue Tetrazol ium Bromide MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的释放量来评价PC1 2细胞受损伤程度。将体外培养的PC12细胞分为6组：正常对照组、氧糖剥夺/复糖复氧常温组、氧糖剥夺/复糖复氧32℃组(OGD/R+32℃).氧糖剥夺/复糖复氧32℃给药组(OGD/R+32℃+LY294002组)、氧糖剥夺/复糖复氧27℃组(OGD/R+27℃).氧糖剥夺/复糖复氧27℃给药组(OGD/R+27℃+LY294002组),流式细胞仪检测各组细胞标本的细胞凋亡水平；通过Western-Blot技术,检测各组细胞标本中p-Akt的含量,结果采用SPSS17.0软件进行统计学分析。[结果] (1)MTT分析：以正常对照组细胞活力为100%,OGD/R造模组PC12细胞的百分活力明显下降,约为正常对照组的21.17%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)：27℃C组PC12细胞百分活力约为正常对照组的37.17%,32℃C组PC12细胞百分活力约为正常对照组的34.12%,较正常对照组均上升,差异有统计学意义(P<0.05),OGD/R+27℃+LY294002组和OGD/R+32℃+LY294002组与OGD/R常温组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)LDH释放量：正常对照组PC12细胞LDH释放的量较少,OGD/R造模组PC12细胞的LDH释放量明显增加,达到了正常对照组的2倍,与正常对照组相比差异有显著意义(P<0.05),27℃ OGD/R组与32℃ OGD/R组PC12细胞LDH释放量与OGD/R模型组比均下降,差异有统计学意义(P<0.05),OGD/R+27℃+LY294002组和OGD/R+32℃+LY294002组与OGD/R常温组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 (3)低温组p-Akt的蛋白质表达量均较常温组高,并且温度越低表达量越高,差异有统计学意义(P<0.05)。OGD/R+32℃+LY294002组p-Akt的蛋白质表达量较OGD/R+32℃组的p-Akt的蛋白质表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。OGD/R+27℃+LY294002组p-Akt的蛋白质表达量较OGD/R+27℃组的p-Akt的蛋白质表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)[结论]低温对OGD/R损伤的PC12细胞损伤具有保护作用,该作用可能通过PI3K/Akt信号通路起作用。