【摘 要】
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目的探讨化学合成siRNA沉默HPV18 E6基因对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法化学合成两条靶向HPV18 E6的siRNA序列,用脂质体法瞬时转染HeLa细胞,同时设立脂质体
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目的探讨化学合成siRNA沉默HPV18 E6基因对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法化学合成两条靶向HPV18 E6的siRNA序列,用脂质体法瞬时转染HeLa细胞,同时设立脂质体细胞对照。半定量RT-PCR检测HPV18 E6基因沉默对E6基因自身及宫颈癌特异性人半翼基因(human wings apart-like,hWAPL)转录表达的影响。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性。细胞免疫化学技术检测p53蛋白表达水平的变化。流式细胞技术(FCM)检测细胞周期变化及细胞凋亡。透射电镜观察转染后细胞超微结构改变。结果MTT检测结果显示20nM、50nM和80nM终浓度转染后细胞增殖活性均有下降,以50nM浓度转染时细胞活性下降最为显著。RT-PCR检测结果显示,各时间点E6和hWAPL基因转录表达水平与细胞对照组比较均有降低,以48h时降低最为明显。细胞免疫化学结果显示转染后p53蛋白表达水平增高。流式细胞分析显示转染后细胞周期呈现明显的G1期阻滞;转染后未见明显细胞凋亡。透射电镜下可见细胞线粒体肿胀,偶见凋亡细胞。结论化学合成的siRNA可有效沉默HeLa细胞中E6基因的表达,进而使hWAPL基因转录表达水平下调和p53蛋白表达水平上调,最终导致细胞增殖活性下降、细胞周期阻滞和超微结构的改变等。
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