用2-氨基嘌呤荧光探针识别单碱基多态性方法的研究

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DNA分子是人体最主要的遗传物质,单碱基是DNA分子的结构与功能的基本单位,在很多情况下,DNA的突变和损伤是从单碱基的突变开始的,因此研究单碱基的多态性有很重要的意义。现如今,利用带有标记且已知序列的寡聚核苷酸探针识别单碱基多态性是环境毒理学研究领域的重要课题。在近几十年中,荧光探针的种类在增多,功能在发展,其中2-氨基嘌呤是一种类嘌呤物,其本身具有良好的荧光性,是被广泛认可的荧光探针。本文研究了2-氨基嘌呤在识别单碱基多态性过程中荧光属性的变化,主要包括三部分:(1)改变寡聚核苷酸单链中2-氨基嘌呤两侧相邻碱基的类型,形成由碱基ATCG组成的十六种微环境,检测2-氨基嘌呤在这十六种微环境中荧光属性的变化情况。(2)用2-氨基嘌呤探针单链与其对位分别为ACGT四种碱基的互补序列寡聚核苷酸单链杂交,检测2-氨基嘌呤在与对位不同碱基配对时,其荧光性质的变化,通过分析寻找2-氨基嘌呤荧光特性变化与碱基类型变化之间的关系,从而可以通过荧光特性的表征来达到识别单碱基类型的目的。(3)用2-氨基嘌呤探针单链与其对位位置无碱基的寡聚核苷酸单链杂交,检测2-氨基嘌呤在对位碱基缺失状态下荧光性质的变化,通过分析建立2-氨基嘌呤荧光特性变化与碱基缺失态之间的关系,从而可以通过荧光特性的表征来达到识别单碱基是否出现缺失行为。分析了2-氨基嘌呤识别单碱基多态性的过程中,由于受到微环境的变化的影响而出现的适用性差异,并初步建立了2-氨基嘌呤在相邻碱基变化的十六种微环境中识别单碱基多态性的检测方法。
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