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目的:对多囊卵巢综合征(Polycysticovarysyndrome，PCOS)患者瘦素水平的变化及其相关因素进行分析，探讨血清性激素、胰岛素抵抗(Insulinresistance，IR)与瘦素抵抗(Leptinresistance，LR)的关系；研究PCOS患者卵泡液瘦素水平变化及与卵细胞受精率、卵裂率的关系；探讨瘦素对人卵巢黄素化颗粒细胞雌激素(E2)和孕激素(P)分泌的体外影响；研究瘦素受体后信号转导分子JAK2(januskinases2)和STAT-3(signaltransducersandactivatorsoftranscription)在PCOS的瘦素抵抗发病机制中的可能作用；寻找可能的基因突变位点，从基因功能调节方面进一步探讨PCOS瘦素抵抗的确切机理。
方法:1.PCOS患者62例，根据体重指数(BMI)分为肥胖PCOS组30例(BMI≥24kg/m2)和非肥胖PCOS组32例(BMI＜24kg/m2)。同时选择年龄和体重相匹配的62例月经规律的正常妇女作为对照，根据BMI分为肥胖对照组30例和非肥胖对照组32例，用放射免疫法测定血清促黄体生成素(Luteinizinghormone，LH)、卵泡刺激素(Folliclestimulatinghormone，FSH)、睾酮(Testosterone，T)的水平；采用ELISA法测定血清瘦素(Leptin)的浓度；采用放射免疫法测定血清空腹胰岛素(Fastinginsulin，FIN)的浓度；采用葡萄糖氧化酶法测定血浆空腹血糖(Fastingplasmaglucose，FPG)；采用HOMA(Homeostasismodelassessment，HOMA)模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。2.留取行IVF-ET治疗的PCOS患者(PCOS组，n=32例)和因输卵管因素不孕妇女(对照组，n=32例)的卵泡液，利用ELISA法和RIA法分别测定卵泡液瘦素浓度和内分泌指标，观察并记录两组卵细胞受精率、卵裂率。3.将来自体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的卵巢黄素化颗粒细胞纯化后，在不同的浓度瘦素(0、10、20、100ng/ml)和FSH(0、1、5、10IU/ml)单独或联合作用下进行体外培养48小时，收集培养液，用放射免疫方法测定颗粒细胞产生E2及P的浓度。4.应用免疫沉淀技术及增强化学发光法(Enhancedchemiluminescence，ECL)检测PCOS患者和正常对照组脂肪组织中JAK2和STAT3蛋白质的酪氨酸磷酸化程度，并进行半定量分析；采用免疫沉淀、薄层层析及γ液闪计数方法检测JAK2激酶的活性，并进行分析。5.应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-singlestrandconformationpolymorphism，PCR-SSCP)银染技术结合DNA直接测序，检测PCOS患者及正常对照组的腹壁脂肪组织中瘦素受体(LEPR)基因第2、4、6、7、8、13/14、20外显子的基因突变。
结果:1.肥胖PCOS组血清瘦素水平明显高于非肥胖PCOS组和对照组(P＜0.01,P＜0.01)；非肥胖PCOS组血清瘦素水平明显高于非肥胖对照组(P＜0.01)，而与肥胖对照组无显著差异(P＞0.05)。偏相关分析显示PCOS患者血清瘦素水平与BMI和HOMA-IR均呈高度正相关(P＜0.01，P＜0.01)，与血FSH/LH比值和雄激素水平无相关性(P＞0.05)。2.(1)PCOS和正常组卵泡液瘦素与睾酮呈正相关(r=0.444,P＜0.01)；(2)PCOS组卵泡液瘦素水平明显高于对照组(P＜0.01)；(3)PCOS组卵细胞受精率、卵裂率明显低于对照组(P＜0.01)。3.(1)不同浓度的瘦素对黄素化颗粒细胞E2和P的基础分泌功能无明显影响；(2)FSH能促进黄素化颗粒细胞E2和P的分泌，随FSH浓度增加，E2和P的水平逐渐增高；(3)不同浓度瘦素对FSH促进黄素化颗粒细胞E2的分泌均有抑制作用，随瘦素浓度增加，抑制作用逐渐增强，但对P的分泌无影响。4.(1)颗粒细胞JAK2和STAT3蛋白质酪氨酸磷酸化分析表明，PCOS患者酪氨酸磷酸化程度与正常对照组相比均显著下降(P＜0.05)。(2)颗粒细胞JAK2激酶的活性分析表明，PCOS患者JAK2的活性比正常对照组下降35.53％，差异具有极显著性意义(P＜0.01)。5.24例研究对象发现外显子4上有位置异常的电泳条带，经直接测序分析，为A670→G670的纯合多态性突变，即109位氨基酸由赖氨酸(K)置换成精氨酸(R)。其中PCOS患者18例，非PCOS患者6例，PCOS患者的该位点检测到的A→G的多态性变异频率明显高于年龄匹配的正常育龄妇女对照组。所有检出第4外显子K109R多态性的个体，其血清瘦素水平高于未检出变异者。
结论:1.PCOS患者血清瘦素水平与BMI和血胰岛素水平密切相关。PCOS患者可能同时存在瘦素抵抗和胰岛素抵抗。2.PCOS患者卵泡液瘦素水平增高对卵细胞受精率、卵裂率有影响，可能是其IVF-ET妊娠成功率低的原因之一。3.瘦素抑制FSH刺激卵巢黄素化颗粒细胞雌激素的分泌，高浓度瘦素可影响卵泡发育和黄体形成。4.PCOS瘦素抵抗的患者中，其发生瘦素抵抗的重要环节是由于瘦素信号转导通路中，JAK2和STAT3蛋白质酪氨酸磷酸化程度降低，JAK2激酶的活性降低从而减弱了瘦素信号。5.PCOS患者编码瘦素受体胞外区的瘦素受体(LEPR)基因的第4外显子突变频率高于正常对照组，4外显子K109R多态性可能与多囊卵巢综合征有遗传倾向的瘦素抵抗状态有关。
以上结论提示PCOS患者可能同时存在瘦素抵抗和胰岛素抵抗；高浓度瘦素可影响卵泡发育和黄体形成，影响卵细胞受精率、卵裂率，导致IVF-ET妊娠成功率降低；瘦素受体后信号转导通路中JAK2和STAT3的酪氨酸磷酸及JAK2激酶活性在PCOS瘦素抵抗的发生机制中起着关键作用，是PCOS病理生理改变的重要机制；PCOS患者瘦素受体基因4外显子A670→G670的纯合多态性突变可能影响瘦素受体与配体的结合，并影响瘦素受体后信号转导。
本研究的创新性：1.首次从蛋白质水平系统研究了PCOS发生瘦素抵抗时，JAK2和STAT3功能及活性变化，提示瘦素受体后信号缺陷可能是PCOS患者发生瘦素抵抗的重要原因。2.首次检测了PCOS患者脂肪组织JAK2和STAT3磷酸化的表达及JAK2激酶的活性，为以后的临床应用研究提供了新的方法。3.以瘦素分泌并发挥生物效应的主要组织之一的脂肪组织为研究对象进行瘦素受体基因的分析。