选题依据:款冬花为菊科植物款冬(Tussilago farfara L.)的干燥花蕾,具有润肺下气、止咳化痰的功效,蜜炙是款冬花最常见的炮制方式,可以增强其润肺止咳作用。课题组前期研究发现款冬花梗等非药用部位与花蕾在化学成分上存在差异,花梗无明显的止咳化痰作用。蜜炙品目前尚无规格等级标准,通过我们调研发现由于蜜炙前净制不够,蜜炙品同样存在花梗过多的问题。课题组前期已经建立款冬花药材的商品规格等级标准,本研究拟在前期研究基础上,建立款冬花蜜炙品的商品规格等级,促进优质优价交易体系的形成以及市场交易秩序的规范化和合理化。此外,蜜炙会导致复杂的化学变化,一是吸附了来源于炼蜜的化学成分,二是高温炒制过程中也可能有化学成分的转化。明确款冬花蜜炙前后化学成分的变化,有助于提升款冬花蜜炙品的质量控制、阐明款冬花蜜炙的科学内涵。目的:首先制定款冬花蜜炙品的商品规格等级,为款冬花蜜炙品的市场交易提供依据;其次,采用代谢组学技术从整体上比较款冬花蜜炙前后的化学变化,筛选并鉴定蜜炙前后的差异成分,阐明款冬花蜜炙前后的化学差异。方法:(1)款冬花蜜炙品商品规格等级的建立:基于2015《中国药典》现有指标(薄层鉴别、水分、灰分、浸出物、款冬酮的含量测定),以及课题组新建立的绿原酸含量测定方法以及特征图谱方法,对款冬花生品及蜜炙品进行相应研究,制定蜜炙品商品规格等级标准。(2)款冬花蜜炙品化学成分快速识别:基于UHPLC-Q-Exactive HRMS技术,结合对照品对照、文献液质数据及化合物裂解规律,对款冬花生品、炼蜜进行系统分析,在明确款冬花和炼蜜化学成分的基础上,进一步对蜜炙品的化学成分进行深入解析。(3)款冬花生品及蜜炙品的化学比较:基于液质联用代谢组学多元统计技术,以VIP>1.0且FC>1.2或<0.8为标准,筛选款冬花蜜炙前后的差异化合物,根据质谱定性结果对差异化合物进行鉴定,通过Graph Pad Prism 5.01软件对差异化合物进行半定量分析,按化合物类别分析蜜炙后差异化合物的变化趋势。结果:(1)根据款冬花药材的商品规格等级初步制定蜜款冬花饮片的规格等级标准。总灰分、酸不溶性灰分、款冬酮含量在蜜款冬花统货和选货中具有显著性差异,而薄层鉴别、浸出物、特征图谱、绿原酸等项目不能作为区分蜜款冬花统货和选货的依据。由于款冬花酸不溶性灰分较低,仅将款冬酮含量纳入统货和选货的商品规格等级标准。最终制定蜜款冬花选货的标准为:净花蕾重量占比>80%,花梗、根茎、等非药用部位占比≤5%,款冬酮含量≥0.080%;款冬花统货的标准为:净花蕾、带梗花蕾重量占比>70%,花梗、根茎、等非药用部位占比≤20%,款冬酮含量≥0.070%。(2)采用UHPLC-Q-Exactive HRMS的方法,从款冬花生品共指认出113个化合物,从炼蜜中指认出42个化合物,其中生品和炼蜜中有31个共有成分,包括氨基酸类和苯丙素类成分;从款冬花蜜炙品中指认出121个化合物,蜜炙品检测到来源于炼蜜的12个化合物,主要为生物碱类和黄酮类,炼蜜中的成分除脱落酸、diosmetin和lasiocarpine外,其他9个成分在蜜炙品中都能检测到。(3)基于UHPLC-Q-Exactive HRMS代谢组学技术,对款冬花生品及蜜炙品进行了化学比较,通过多元统计分析方法筛选出款冬花蜜炙后发生变化的44个化合物,其中36个化合物为款冬花本身的固有成分,8个成分为来源于蜂蜜的化合物。33个款冬花蜜炙前后的差异成分为本研究首次发现。结论:本文建立了款冬花蜜炙品商品规格等级标准,为市场交易秩序的规范和合理化奠定基础。通过UHPLC-Q-Exactive HRMS技术鉴定款冬花生品、蜜炙品及炼蜜中的化学成分,蜜炙品中来源于蜂蜜中的独有化学成分,可以用于蜜炙品的真伪鉴别。基于UHPLC-Q-Exactive HRMS代谢组学技术筛选并鉴定了44个款冬花蜜炙过程的差异化合物,为提升款冬花蜜炙品的质量控制、阐明款冬花蜜炙的科学内涵奠定了基础。