叶螨科(Tetranychidae)害螨主要有朱砂叶螨、二斑叶螨、山楂叶螨、柑桔全爪螨和神泽叶螨等。它们分布范围广,寄主植物多,是农业生产上的重要害螨。随着农药的大量使用,其抗性问题甚至比其它农作物害虫更为严重。所以利用共生菌Wolbachia诱导的生殖异常行为,如孤雌生殖、雌性化等,也许是更加有效地防治叶螨科害螨的方法之一。本文通过PCR扩增对我国叶螨科主要害螨Wolbachia的感染情况进行了检测,同时测定了Wolbachia的wsp基因序列,最后根据Wolbachia的wsp基因序列,建立了我国叶螨体内感染的Wolbachia与国外叶螨体内感染的Wolbachia的系统发育树,研究分析了它们之间的进化关系。 一、实验材料的采集与饲养 按计划在全国范围内采集了朱砂叶螨25个地理种群,二斑叶螨13个地理种群,山楂叶螨4个地理种群,柑桔全爪螨3个地理种群,神泽叶螨2个地理种群。在实验室内隔离饲养。 二、用PCR技术监测我国发生的主要叶螨的Wolbachia感染情况 采用一对特异性引物,从每个地理种群中随机挑取40头雌成螨进行PCR扩增,发现我国朱砂叶螨有18个地理种群感染了Wolbachia,二斑叶螨13个地理种群全部感染了Wolbachia,山楂叶螨、柑桔全爪螨和神泽叶螨都没有感染Wolbachia。结果说明Wolbachia的感染在各地理种群间和各地理种群内的分布是不同的。 三、测定Wolbachia的wsp基因序列,并对各不同地理种群之间进行比较 采用克隆测序方法,将纯化后的PCR产物与载体连接,再转化到感受态大肠杆菌中,筛选阳性克隆测序。每个地理种群随机抽取3个已感染Wolbachia的样本进行序列测定,以它们的一致序列为准。结果发现不同地理种群间的Wolbachia的wsp基因序列是不同的,但差异并不大,片段长度都为596bp左右。