论文部分内容阅读
肉质性状指标包括色泽、质地、硬度、嫩度、大理石度等特征,其中,肉中脂肪沉积量及沉积方式对肉品质非常重要。肌肉脂肪通常被分为肌间脂肪和肌内脂肪(Intramuscular fat, IMF), IMF与肉的嫩度和风味等食用价值密切相关。近年来,通过遗传改良手段提高IMF含量以改善肉品质是肉牛遗传育种的一个研究热点。骨骼肌组织中的成肌细胞是肌肉组织的前体细胞,在骨骼肌的生长和发育中具有重要作用。C/EBPα基因是C/EBP家族中与脂肪细胞增殖分化密切相关的一个亚型。本研究以牛成肌细胞为试验对象,以C/EBPα基因为目标基因,转染Ad-C/EBPα重组腺病毒,探讨脂肪分化转录因子C/EBPα在牛的成肌细胞中成脂分化中的功能。主要研究成果如下：1.运用Ⅳ型胶原酶消化法和差速贴壁法分离培养了牛成肌细胞,并通过形态学和诱导分化方法鉴定了牛成肌细胞。2.研究发现,胰岛素可诱导牛成肌细胞成脂转分化。DMEM+20%FBS+10%HS培养基胰岛素组的成脂效果优于DMEM+10%FBS培养基胰岛素组。实时荧光定量PCR检测诱导转分化过程中,脂肪分化相关基因C/EBPβ、C/EBPδ和PPARγ相对表达量增高,但C/EBPα降低：成肌相关基因中,Myf5相对表达量降低,但MyoD增高。3.Ad-C/EBPα重组腺病毒在牛成肌细胞中可以达到90%的侵染效率,并且可以成功诱导牛成肌细胞成脂转分化。实时荧光定量PCR检测结果表明,C/EBPα基因在第1、3、5、7天均有高水平表达,且脂滴明显增多。成脂相关基因中,LPL和PPARγ在后期增高；成肌相关基因中,Myf5相对表达量下降,MyoD增高,Pax7先降低后增高。综上,本试验成功培养出牛成肌细胞,建立了适于牛成肌细胞体外培养的体系。研究发现,胰岛素和C/EBPα均可成功诱导成肌细胞向成脂转分化,为C/EBPα基因在牛脂肪组织生长发育过程中发挥的作用提供证据,并为进一步研究牛脂类代谢的分子机制和深入进行牛肉质性状改良奠定理论基础。