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目的:通过构建针对skp2的siRNA质粒来转染人非小细胞肺腺癌细胞A549,检测其对skp2mRNA、p27mRNA表达的影响以及对细胞增殖的影响。
方法:由公司构建针对skp2的siRNA质粒,采用脂质体法瞬时转染肺腺癌细胞A549,使用RT-PCR法检测实验组和对照组细胞内skp2mRNA和p27mRNA表达情况,并使用MTT法检测实验组和对照组细胞的增殖能力变化情况。此外,tunel法检测各组细胞的凋亡情况。
结果:公司成功构建了针对skp2的pGCsilencerTM U6/Neo/GFP/RNAi质粒:skp2-1,skp2-2,skp2-3以及阴性对照质粒:skp2-nc。实验共分5组包括实验组:skp2-1.skp2-2,skp2-3,对照组:skp2-nc,空白组。实验组与空白对照组相比,其对skp2mRNA表达抑制率分别下调67.7％,61.6％,61.4％,差异有统计学意义(P<0.05)。而对p27mRNA表达影响无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。转染后对各组细胞生长增殖能力的影响,其中各实验组生长明显受抑制(P<0.05),抑制率分别为25.4％,25.5％,25.1％。而阴性对照组抑制不明显,差异无统计学意义(P>0.05),抑制率分别为14.9％,14.4％。TUNEL法检测各实验组细胞凋亡率与lipofectamine干扰组相比,差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率分别为(16.4±2.2)％,(14.6±1.9)％,(14.3±1.9)％,而skp2-nc组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),skp2-nc、skp2-lipo组凋亡率分别为(2.5±0.6)％,(2.2±0.1)％。并且实验组可以观察多量的凋亡细胞。
结论:RNAi可以对肺腺癌细胞A549的skp2基因产生明显抑制作用,对p27基因表达无明显影响,由此推论对skp2基因表达的影响发生在转录,而对p27基因的表达影响则是发生在转录之后。此外通过RNAi对skp2产生抑制作用后可以使细胞的增殖能力明显受抑制,并诱导细胞凋亡。