目的：利用基因沉默和转染技术，在肺癌A549细胞株中建立Semaphorin4D基因沉默体系，并探讨沉默Semaphorin4D基因对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响以及可能的作用机制。方法：通过脂质体介导，将化学合成的Semaphorin4D siRNA转染A549细胞，采用实时荧光定量PCR（Real time PCR）法，细胞免疫荧光法和Western blot法分别检测转染前后Semaphorin4D mRNA和蛋白的表达水平，并在A549细胞中定位。MTT法检测Semaphorin4D siRNA对A549细胞增殖的影响，Transwell小室法检测其转染前后对A549细胞迁移和侵袭能力的影响，此外，通过Westernblot法检测其对A549细胞表达AKT/P-Akt的影响。结果：Real time PCR法筛选显示Semaphorin4D siRNA-C链干扰效果最佳，其干扰效率为69%，与对照组相比有统计学意义；细胞免疫荧光法可以初步确定Semaphorin4D siRNA-C组靶蛋白荧光最弱，表达于细胞浆；Western blot法筛选显示Semaphorin4D siRNA-C链沉默效果最佳，与对照组相比有统计学意义，并检测到该链转染A549细胞明显抑制P-Akt的表达；与对照组比较，转染Semaphorin4D siRNA-C链24h后，A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显下降。结论：RNA基因沉默技术成功的干扰A549细胞中Semaphorin4D基因的表达，通过下调Semaphorin4D基因的表达，抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力，可能是通过PI3K/AKT通路来实现的。