目的：本实验通过研究京尼平苷对体外培养兔膝骨关节炎软骨细胞的增殖、Ⅱ型胶原、周期蛋白2(CDC2)表达和软骨细胞培养上清液中IL-1、TNF-α含量的影响,探讨京尼平苷对 OA 软骨退变的保护作用及可能的机制,为临床应用中药栀子治疗OA提供理论指导。 　　方法：采用改良Hulth法制备兔膝OA模型(前交叉韧带+内侧副韧带切断、内侧半月板切除),15只日本大耳白兔随机分为：A模型组12只；B正常组3只,通过形态学、影像学、生化指标鉴定模型,提取正常组、模型组软骨细胞,原代培养、传代。光镜观察原代、二代、四代细胞形态,免疫荧光和 ELISA 检测模型组软骨细胞Ⅱ型胶原表达以及细胞培养上清液中IL-1、TNF-α含量鉴定兔膝OA软骨细胞。培养兔膝OA软骨细胞应用不同浓度京尼平苷(20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml)干预：噻唑蓝染色(MTT)法检测软骨细胞增殖,Western-blot 检测Ⅱ型胶原及细胞分裂周期分裂基因2(CDC2)蛋白的表达,PCR检测Ⅱ型胶原mRNA的表达；ELISA检查培养兔膝OA软骨细胞上清液中IL-1、TNF-α含量影响。 　　结果：从形态学、影像学、生化指标表明改良Hulth法成功构建兔膝OA模型,关节液中IL-1含量为正常组77.64±9.37pg/ml；造模4W175.52±18.7 pg/ml；造模8W363.42±54.11 pg/ml,关节液中TNF-α含量为正常组：49.99±5.28 pg/ml；造模4W143.38±48.34 pg/ml；造模8W280.72±42.24 pg/ml,血清中IL-1含量为正常组10.66 ±1.04 pg/ml；造模4W51.19±4.66 pg/ml；造模8W96.83±9.48 pg/ml,血清中TNF-α含量为正常组15.74±1.05 pg/ml；造模4W25.22±2.43 pg/ml；造模8W46.15±7.04 pg/ml(P<0.05)。原代兔膝OA软骨细胞呈多角形,培养72h后基本贴壁,传代后细胞生长加快,随着传代次数的增加细胞逐渐出现去分化现象,呈圆形,多短触角；免疫荧光检测模型组软骨细胞中有Ⅱ型胶原表达。ELISA检测模型组软骨细胞培养上清液中IL-1、TNF-α含量增高,IL-1含量为正常组6.948±0.48 pg/ml；VS造模组65.47 ±5.52 pg/ml,TNF-α含量为正常组5.13±0.74 pg/ml；VS模型组45.49±3.99 pg/ml (P<0.05)。鉴定兔膝OA软骨细胞。随着给药浓度的不同(20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml)对兔膝OA软骨细胞增殖有明显的促进作用,各组24小时增殖率分别为(3.87 ±5.61)%、(23.48±3.50)%、(11.16±7.048)%、(9.29±3.43)%；48小时增殖率分别为(30.01±1.28)(38.80±.2.65)(44.85±.43)(36.16±3.47)；72小时增殖率分别为(4.91±2.04)(8.29±1.32)(13.84±2.54)(3.23±3.02),(P<0.05)；软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白和基因表达、CDC2蛋白合成逐渐增高,各组Ⅱ型胶原蛋白表达分别为0.448±0.0084；0.391±0.017；0.44±0.019；0.68±0.016；0.484±0.014；各组Ⅱ 型胶原基因的表达分别为0.383±0.035；0.492±0.047；0.574±0.057；0.618±0.058；0.653±0.057各组CDC2蛋白表达分别为0.478±0.046；0.579±0.025；0.471±0.037；0.601±0.056；0.8±0.043；(P<0.05)。体外培养兔膝OA软骨细胞上清液中IL-1、TNF-α含量逐渐降低,各组IL-1含量分别为：6.948±0.48 pg/ml；65.47±5.52 pg/ml；52.87 ±4.24 pg/ml；43.25±5.55 pg/ml；38.3±1.95 pg/ml；26.82±1.34 pg/ml,各组TNF-α含量分别为：5.13±0.74 pg/ml；45.49±3.99 pg/ml；41.03±2.54 pg/ml；38.12±2.11 pg/ml；32.37±2.42 pg/ml；25.65±2.59 pg/ml。与对照组相比有差异性(P<0.05)。 　　结论：改良Hulth法造模是制备兔膝OA模型的有效方法,并可以建立体外培养兔膝OA软骨细胞体系；京尼平苷对体外培养的兔膝OA软骨细胞有一定的增殖作用；并可促进CDC2表达,Ⅱ型胶原合成,减少IL-1、TNF-α分泌,抑制软骨细胞退变；保护软骨细胞原有的表型。为中药栀子治疗骨关节炎的应用提供理论依据。