糖尿病是由多病因引发的以高血糖为特征的代谢紊乱,往往伴有诸多并发症,目前已经成为严重威胁人类健康的疾病之一。胰岛素是临床应用中治疗糖尿病最有效的药物之一。速效胰岛素是一类通过基因工程方式获得,与餐后正常人体内胰岛素分泌代谢时相最为接近的胰岛素类似物。近年来,速效胰岛素以其吸收快、安全性好等特点受到越来越多研究者的关注。目前,市场上主要有三种速效胰岛素：赖脯胰岛素、门冬胰岛素和赖谷胰岛素。B27K-DTrI即B27赖氨酸去三肽胰岛素是2005年由丁金国等人利用甲醇酵母表达系统成功制备的单体速效胰岛素类似物。经小鼠惊厥法测定其活性为人胰岛素生理活性的80%。分子筛实验表明重组B27K-DTrI的单体性质比赖脯胰岛素的单体性质更好。但是,利用甲醇酵母表达系统制备B27K-DTrI,发酵周期长并需经XAD-7疏水层析、Sephadex G25、离子交换色谱、HPLC等多步纯化,不容易快速得到目的蛋白。本论文报道了利用大肠杆菌内含肽表达系统制备B27K-DTrI的方法。利用内含肽自剪切特点简化了B27K-DTrI前体(MIP)的纯化步骤,MIP的初表达量为277.29 mg/L发酵液。经胰蛋白酶酶切后,MIP转变为B27K-DTrI胰岛素。对酶切产物进行HPLC纯化,得到的B27K-DTrI纯度为87.69%,经质谱鉴定其分子量与理论值一致。