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背景:主要组织相容性分子(MHC)在免疫应答中起着十分重要的作用,其主要生物学功能是将抗原肽提呈给T细胞识别。MHC分子具有高度的多态性,多态性的氨基酸残基常位于抗原肽结合槽,使MHC分子的型别影响对抗原肽的结合和提呈,从而影响T细胞应答。HLA-A2为最常见的HLA I类分子型别,HLA-A2阳性个体约占我国人群的50%。包括多达99种亚型,其中HLA-A*0201,-A*0206,-A*0207三个亚型的基因频率最高[1,2],分析占人群中大多数的HLA-A*02亚型分子识别的抗原肽谱、亲合力及其诱导细胞毒性T淋巴细胞(cyto toxic T lymphocyte, CTL )反应能力具有十分广泛的实际意义,近年来来自国外的临床移植病例观察资料也提示供受者间HLA-A2亚型相配能显著提高造血干细胞移植后受者的存活率和移植效果[3]。目的与方法:为了克隆HLA-A*0206和-A*0207全长cDNA序列,构建并表达HLA-A*0206和-A*0207的α链(重链)胞外区与BirA酶底物肽(BirA substrate peptide, BSP)的融合蛋白。本研究先采用RT-PCR技术从HLA-A*0206和-A*0207阳性个体的外周血PBMC中分别克隆出HLA-A*0206和-A*0207基因的全长cDNA序列,构建HLA-A*0206和-A*0207克隆载体。再利用PCR技术从构建的克隆载体中扩增HLA-A*0206和-A*0207的α链(重链)胞外段序列,分别经双酶切置换本室保存的HLA-A*0201-BSP重组体中的HLA-A*0201胞外段序列,使HLA-A*0206和-A*0207与BirA酶底物肽(BirA substrate peptide, BSP)序列融合,构建HLA-A*0206和-A*0207-BSP融合基因的表达载体。然后将该表达载体转化E .coli BL21(DE3)后获得表达产物,通过体外稀释复性,初步纯化的表达产物通过ELISA和WESTERN-BLOT检测。以期为进一步构建HLA-A*0206和-A*0207四聚体或包被在微球上制成人工抗原提呈细胞,探讨相应HLA-A2亚型的功能特点提供了物质基础。结果:成功的扩增出HLA-A*0206和-A*0207重链的全长cDNA序列及其胞外段序列,构建了HLA-A*0206-BSP和-A*0207-BSP融合基因的表达载体,并经限制性酶切、PCR鉴定和DNA测序证实;该表达载体转化E .coli BL21(DE3)后获得表达产物,通过体外稀释复性,初步纯化的表达产物能够与β2微球蛋白(HLA I类分子轻链)及HLA-A2限制性抗原肽(HBV core 18-27)折叠形成具有HLA I类分子天然构像的抗原肽/HLA-A2复合物单体。结论:本研究在克隆HLA-A*0206和-A*0207重链全长cDNA的基础上,构建了HLA-A*0206-BSP和-A*0207-BSP融合基因的表达载体,为进一步构建HLA-A*0206和-A*0207四聚体,探讨相应HLA-A2亚型的功能特点提供了物质基础。