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目的:观察自杀基因HSV-tk/GCV与热疗联合对肺癌细胞株A549的抗肿瘤效应，探讨自杀基因与热疗联合应用治疗肺癌的协同机制，为肺癌的临床治疗提供实验依据。
方法:构建真核表达载体pcDNA3.0-tk，经Eco.I及Xh.I双酶切鉴定并测序；通过脂质体法转染A549肺癌细胞，经G418抗性筛选并进行单克隆化培养后，RT-PCR、Westernblot检测获得稳定表达细胞克隆；应用MTT法、流式细胞仪、免疫细胞化学等方法，测定A549细胞经酶前体药物GCV联合41℃热疗作用后，细胞增殖活性、细胞凋亡率和细胞周期的改变，并观察细胞hsp70、fas、fasL和Cx等蛋白质表达、分布的改变。
结果：1.构建的真核表达载体pcDNA3.0-tk，酶切后电泳和DNA测序结果显示载体构建正确；2.pcDNA3.0-tk转染A549细胞，获得稳定表达克隆，mRNA和蛋白水平检测表明肺癌细胞A549中表达tk。3.热疗可抑制A549肺癌细胞的增殖，SPF显著降低；GCV治疗显著抑制A549-tk细胞生长，并呈现剂量依赖性，细胞阻滞于S期，有明显的诱导凋亡效应。4.热疗显著增强自杀基因对A549细胞的杀伤作用，两者协同可显著提高A549细胞HSP70、FasL和Cx表达，但对Fas的影响不明显。
结论：本研究成功构建了自杀基因真核表达载体pcDNA3.0-tk并转染肺癌细胞A549，获得了稳定表达TK的肺癌细胞株。自杀基因治疗和热疗联合在A549肺癌细胞增殖的抑制、促进细胞的凋亡和抑制细胞周期进程等方面有互补协同作用，Fas/FasL信号途径及旁观者效应可能与两者的协同机制有关。本研究结果为热疗联合基因治疗的新方案提供了初步的实验依据。