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对虾白斑综合症病毒(WhiteSpotSyndromicVirus,WSSV),是一种严重危害对虾养殖业的主要病原,至今仍无有效的防治方法。为进一步了解对虾的先天性免疫机制,本研究比较了细胞免疫中的凋亡和吞噬以及体液免疫中的酚氧化酶原系统在对虾WSSV侵染中起的作用,为对虾病毒有效的防治方法的建立提供了理论依据;为研究对虾免疫相关基因的功能与调控,进一步揭示抗病毒免疫的分子机理,本研究对对虾细菌人工染色体克隆的构建进行了初探,为对虾功能基因组学的研究提供了新的手段。
为比较凋亡、吞噬和酚氧化酶原系统三种免疫反应在抗病毒侵染中所起的作用,本研究用cytochalasinB,z-VAD-FMK和allylthiourea这三种特异的抑制剂分别对凋亡、吞噬和酚氧化酶活力进行活体抑制,通过对感染对虾死亡率及其体内WSSV拷贝数的跟踪检测,发现凋亡和吞噬的抗病毒活性要高于酚氧化酶系统,说明对无脊椎动物的病毒防御来说,细胞免疫比体液免疫所起的作用更大。
通过大片段对虾基因组DNA提取方法的优化、二次片段选择脉冲场电泳条件改进和DNA电洗脱方法的比较,本研究成功回收得到完整性和浓度较高酶切基因组DNA,为构建对虾细菌人工染色体克隆奠定了基础,为相关领域的研究提供了有益的借鉴。