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第一部分UCA1在结直肠癌组织中表达研究目的:在结直肠癌组织中检测尿路上皮癌相关基因1(Urothelial carcinoma associated 1,UCA1)的表达水平,并分析其与临床病理因素和预后的关系。方法:实时RT-PCR技术检测结直肠癌组织中UCA1的表达水平,比较结直肠癌组织及其配对正常组织中UCA1的表达差异。分别收集并整理90例病例的临床病理信息及预后资料,首先通过Logistic回归分析UCA1表达水平对临床病理因素的影响。接下来采用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线,Log-Rank方法比较UCA1高表达组和低表达组之间的生存率,最后采用Cox比例风险模型进行多因素分析,以确定在多因素作用下UCA1对预后的影响。结果:检测90例结直肠癌组织及其配对正常组织中UCA1的表达,进一步证实UCA1在结直肠癌中表达显著上调(P<0.01),有约59%左右的结直肠癌组织中UCA1表达上调2倍以上。UCA1高表达患者表现出更差的预后(P=0.0026),且结直肠癌肿瘤组织中UCA1的高表达与肿瘤大小(P=0.010),肿瘤浸润深度(P=0.041)及淋巴结转移(P=0.035)呈正相关。UCA1(HR=2.395,95%CI=1.044-5.495,P=0.039)和肿瘤转移(HR=3.004,95%CI=1.310-6.899,P=0.009)是结直肠癌患者生存的独立预后因素。结论:UCA1在结直肠癌组织中高表达,并与病床病理因素及预后相关。UCA1是结直肠癌患者生存的独立预后因素。第二部分UCA1在结直肠癌中的功能研究目的:在体外细胞水平明确UCA1对于结直肠癌细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡、耐药等生物学表型的影响。同时在体内动物水平验证UCA1对于肿瘤形成的影响。方法:通过CCK-8和克隆形成,探讨UCA1过表达或表达抑制后对结直肠癌细胞增殖能力及5-FU耐药的影响。通过流式细胞术检测UCA1对细胞周期和细胞凋亡的影响。构建裸鼠成瘤模型探讨UCA1在体内对结直肠癌细胞成瘤能力的影响。结果:沉默UCA1表达后细胞的增殖能力明显降低;而过表达UCA1后细胞的增殖能力明显增加。克隆形成实验发现UCA1能够增加结直肠癌细胞克隆形成能力。裸鼠成瘤实验证明沉默UCA1能够抑制结直肠癌体内细胞增殖;过表达UCA1能够促进结直肠癌体内细胞增殖。在UCA1敲降的和过表达的细胞中,加入不同浓度的5-FU(0.5、1.0、2.0、4.0、10.0和50.0μg/m L)。48小时后通过CCK-8测定细胞活性,可见敲降UCA1能够明显增加HCT116细胞对5-FU的药物敏感性;过表达UCA1能够明显降低SW480细胞对5-FU的药物敏感性。通过流式细胞仪测定细胞凋亡情况,可见敲降UCA1能够明显增加凋亡细胞比例;而过表达UCA1能够明显降低凋亡细胞比例。结论:UCA1能够促进结直肠癌细胞体外和体内的细胞增殖。UCA1能够通过减少凋亡降低结直肠癌细胞对5-FU的药物敏感性。第三部分UCA1促癌机制研究目的:在结直肠癌组织中探讨UCA1通过何种机制促进肿瘤细胞增殖及对5-FU耐药。方法:双荧光素酶激活实验验证UCA1和mi R-204-5p是否通过MRE相结合。RNA免疫沉淀法(RNA immunoprecipitation,RIP)利用Ago2抗体捕获Ago2蛋白及与其结合的RNA,然后通过实时RT-PCR的方法检测UCA1和mi R-204-5p的含量。双荧光素酶激活实验验证CREB1是否是mi R-204-5p的靶基因。双荧光素酶激活实验和Western blot验证UCA1对mi R-204-5p的靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表达调控。最后通过免疫组化检测CREB1在CRC组织中的表达及与预后的关系。结果:双荧光素酶激活实验和RNA免疫沉淀证实mi R-204-5p能够和UCA1通过mi RNA的核糖核蛋白复合物中的Ago2蛋白相结合。UCA1能够通过海绵吸附mi R-204-5p上调其靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表达。我们还发现CREB1作为mi R-204-5p的一个新的靶基因在结直肠癌中表达上调并与患者不良预后相关。结论:UCA1能够通过海绵吸附mi R-204-5p上调其靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表达,从而促进结直肠癌细胞增殖及对5-Fu的耐药。