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目的:研究Nucleostemin特异性RNA干扰(RNAi)联合抗癌药物对人食管癌细胞株Eca-109生长的影响,并对其影响进行初步探讨。
方法:1.实验分组:分为silencer组(S组)、normal组(N组)、单纯用药组和联合用药组。S组为转染PCDNA4/C-NS-silencer质粒的食管癌Eca-109细胞;N组为正常食管癌Eca-109细胞;单纯用药组为单纯应用抗癌药物作用于食管癌Eca-109细胞;联合用药组为NS特异性RNAi联合抗癌药物作用于食管癌Eca-109细胞。2.通过RT-PCR方法检测各组食管癌细胞的NS基因mRNA表达;利用细胞计数法、镜下细胞形态学观察和MTT法测试细胞增殖抑制率检测各组细胞的增殖情况。
结果:1.S组的NS基因表达量下降,明显低于N组,差异具有显著性(p<0.01);S组与N组肿瘤细胞在形态学上比较,可见细胞由梭形趋向于圆形,体积缩小并趋向一致,胞浆丰富,核质比变小,细胞趋于分化,细胞密度明显减小;S组细胞增殖速率明显低于N组正常食管癌细胞,增殖抑制率为79﹪。NS特异性RNAi作用于食管癌Eca-109细胞使细胞NS基因表达受到抑制,导致细胞的肿瘤生物学行为的显著变化,细胞的体外增殖速率明显降低。2.各联合用药组NS基因表达量低于各单纯用药组,差异显著(p<0.05),各联合用药组NS基因表达量比较,S+5-FU(5-氟尿嘧啶)组<S+MTX(氨甲喋呤)组<S+VCR(长春新碱)组<S+ADM(阿霉素)组<S+CS(蟾酥)组<S+As2O3(三氧化二砷)组;形态学上观察,单纯用药组细胞逐渐失去贴壁性,细胞胞浆内空泡和颗粒增多,形态完整性遭到破坏,镜下视野细胞密度减小。联合用药组细胞破坏更严重,细胞内空泡和颗粒更明显,镜下视野细胞密度更小;各联合用药组增殖速率明显低于各单纯用药组,而增殖抑制率明显高于各单纯用药组,差异具有显著性(p<0.05)。比较各联合用药组增殖抑制率,则S+5-FU组>S+MTX组>S+VCR组>S+ADM组>S+CS组>S+As2O3组。
结论:1.化疗药物MTX、5-FU、VCR及ADM与NS特异性RNAi联合对细胞具有一定的协同抑制作用。随着化疗药物对肿瘤细胞的周期特异性效应不同,它们联合NS特异性RNAi协同抑制作用的大小也有差异,阻断细胞于细胞周期S期的MTX、5-FU与NS特异性RNAi的协同作用稍强,这是否与这两种药物和NS特异性RNA干扰都阻断肿瘤细胞于S期的这种同一性有关系,还不甚清楚,需进一步的探讨。
2.中药CS、As2O3联合NS特异性RNAi对细胞具有一定的协同抑制作用。