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目的:研发一种用于联合检测人血清中EB病毒衣壳抗原IgM抗体、衣壳抗原Ig G抗体和核抗原1蛋白IgG抗体的新型蛋白质芯片。方法:在蛋白质芯片固相载体表面点样固定EB病毒衣壳抗原探针和EB病毒核抗原1蛋白探针;固相载体为S-S-PEG-COOH化学修饰的金箔芯片,用EDC和NHS活化羧基以固定特异性抗原为探针。生物芯片的表面化学特征用原子力显微镜(AFM)和傅里叶转换红外光谱(FTIR)描述。通过抗原抗体结合浓度质控、血清稀释度质控等实验对芯片参数进行优化。在基于抗原探针的生物芯片的免疫检测中,以化学发光免疫分析法(CLIA)为标准比较芯片检测的相对敏感性,并通过过量抗原阻断抗体实验、来验证血清抗体结合抗原探针的特异性。为比较生物芯片和CLIA检测EB病毒结果的相关性,将274名EB病毒血清学特征各异的患者血清同步检测,阳性临界值定义为阴性对照值的三倍,使用SPSS的卡方检验比较两种方法,P值小于0.05被认为具有统计学上的显着性差异。最后,组合生物芯片被用于15例传染性单核细胞增多症(IM)和25例系统性红斑狼疮(SLE)的EB病毒感染情况的检测。结果:实验结果表明,化学官能团共价结合在金表面上形成分子自组装单层。与CLIA相比,该蛋白质芯片具有相似的敏感性和特异性。其可视检测限与CLIA测得EB病毒抗体的最低检测限近乎相同,芯片和CLIA的抗体检测限分别为:EBNA-1-IgG 2.91U/ml与3.00U/ml,EBV-VCA-IgG 8U/ml与10U/ml。在EBNA1-IgG浓度界于6U/ml和600U/ml之间和EBV-VCA-IgG浓度界于17U/ml和480U/ml时,生物芯片检测荧光强度值与CLIA-L数值显示出线性相关关系(R~2=0.8246和R~2=0.8128),表明两种方法在检测值上的一致性。在274例血清抗体筛查中,生物芯片和CLIA-L检测阳性率分别是EBNA-1 IgG抗体69.34%和71.89%(P=0.230),EBV-VCA IgG抗体73.72%和71.17%(P=0.311),EBV-VCA IgM抗体6.93%和4.74%(P=0.210),P值均大于0.05。最后,通过组合生物芯片,成功完成对临床EB病毒相关疾病样本的联合抗体检测。在IM检测中,15例患者中有14例显示VCA-IgM抗体阳性反应,15例显示EBV VCA-IgG抗体阳性反应,15例显示EBNA-1 IgG抗体阳性反应。结论:我们设计了一个有意义的S-S-COOH化学修饰的金表面的检测平台,从而研发出一种用于EB病毒血清学筛查的蛋白质芯片,不仅可以用于多种EB病毒相关疾病的EB病毒感染诊断,也可以用于大规模EB病毒流行病学筛查。鉴于其高通量,小型化,且其可以实现联合检测的特点,这将是一个有流行病学筛查潜在价值的工具。