【摘 要】
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目的:检测CPNE7在人结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）组织、细胞系中的表达水平;分析CPNE7表达水平与临床病理资料的相关性及与预后的关系;探索在结直肠癌中,敲减CPNE7基因对肿瘤细胞增殖、侵袭转移的影响。方法:1.通过R语言从TCGA数据库查询并下载结直肠癌患者转录组测序数据及临床数据,分析差异表达基因。分析CPNE7在结直肠癌中的表达水平与临床资料的相关性及预后的关系
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目的:检测CPNE7在人结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）组织、细胞系中的表达水平;分析CPNE7表达水平与临床病理资料的相关性及与预后的关系;探索在结直肠癌中,敲减CPNE7基因对肿瘤细胞增殖、侵袭转移的影响。方法:1.通过R语言从TCGA数据库查询并下载结直肠癌患者转录组测序数据及临床数据,分析差异表达基因。分析CPNE7在结直肠癌中的表达水平与临床资料的相关性及预后的关系。2.通过免疫组织化学染色（immunohischemistry,IHC）检测兰州大学第二医院2018.6-2019.1期间经病理诊断为结直肠癌的组织（结直肠癌组织60例,正常结直肠粘膜组织30例）中CPNE7的表达水平,分析CPNE7表达水平与临床资料的相关性及与预后的关系。3.培养结肠上皮细胞系NCM460和结直肠癌细胞系HT-29、RKO、SW620,通过实时荧光定量PCR（quantity Real-time PCR,q RT-PCR）、蛋白印迹法（western blot,WB）检测4种细胞系中CPNE7 m RNA和蛋白的表达水平。4.通过慢病毒转染敲减结直肠癌细胞系中CPNE7基因表达,q RT-PCR及WB法检测敲减效率,培养CPNE7基因低表达的稳转细胞系,通过CCK8、克隆成型、划痕实验及Transwell侵袭迁移实验等探索敲减CPNE7基因对结直肠癌细胞增殖、侵袭转移的影响。结果:1.通过对TCGA测序数据分析共发现CPNE7（差异倍数=5.3,P=0.000）等2000余个差异表达基因,CPNE7在结直肠癌中高表达,其表达水平与N、M、TNM分期、放疗史、残余瘤和淋巴转移相关。通过COX多因素分析发现:CPNE7是结直肠癌患者的预后独立危险因素（P＜0.05）。2.IHC结果提示CPNE7在结直肠癌中较正常粘膜组织高表达（P＜0.001）,呈棕黄色,主要分布于细胞质,少量分布于细胞核与细胞间质。CPNE7表达水平与生存状态（P＜0.001）有关。K-M法提示CPNE7表达水平与预后相关。通过COX多因素分析发现:CPNE7同样是结肠癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。3.q RT-PCR及WB实验结果提示:CPNE7在结肠癌细胞系中较正常结肠上皮细胞系高表达（P＜0.001）,其中HT29细胞系中表达最高。慢病毒转染敲减RKO细胞CPNE7基因,敲减效率约为60%。敲减CPNE7后,RKO细胞的增殖、侵袭和迁移能力较对照组显著降低（P＜0.05）。结论:CPNE7在结直肠癌组织、细胞系中高表达,CPNE7基因参与结肠癌细胞的增殖、侵袭和转移等恶性生物学行为。CPNE7是结肠癌患者预后的独立危险因素。
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