转脂蛋白基因AsE246在紫云英共生体形成和根瘤器官发生中的功能机制研究

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根瘤菌在豆科植物根瘤内分化形成由宿主植物来源的膜系统包裹,能够固氮的细胞器,被称为共生体(symbiosome)。但是,对于这些植物来源的脂类是如何转运至共生体的,所知不多。本研究中,我们对紫云英根瘤中特异表达的转脂蛋白AsE246的功能及机制进行了研究。体外实验结果表明,重组AsE246蛋白具有脂质结合能力,能够和植物细胞膜上的脂质相结合。更重要的是,我们发现AsE246在体内可以与植物合成的脂质双半乳糖残基甘油二酯(DGDG)相结合。在洋葱下表皮中与红色荧光蛋白DsRed的融合蛋白表现出膜定位的特点。免疫荧光实验表明,AsE246基因编码产物从共生早期阶段,侵入线阶段就开始与共生体共定位。进一步的免疫电镜检测表明,AsE246基因编码产物定位于共生体膜。结果表明AsE246基因参与了共生体膜相关脂质的转运以及共生体形成过程。AsE246的超表达导致结瘤数增加,而RNAi则导致了结瘤数量减少,固氮酶活降低,DGDG含量降低,共生体发育异常,共生体膜皱缩,共生体周质空间增大,以及共生体内部积累聚p羟基丁酸(PHB)颗粒。对转基因植株的根瘤菌早期侵染时间的观察表明:AsE246通过影响侵入线的形成而进一步影响了根瘤的器官形成。综合以上结果可知,AsE246是共生体膜上所需脂质转运机制的重要组分,是豆科植物-根瘤菌共生关系建立中的必须基因。
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